細胞角蛋白8負調控NF-κB信號通路誘導結腸炎發(fā)生.pdf

1、NF-κB信號通路廣泛參與了多種生物學過程的調控,包括細胞增殖、存活、凋亡、免疫反應、炎癥等,該信號通路的異?；罨蓪е露喾N疾病。角蛋白CK8是中間纖維的組成成分,其過表達與腫瘤發(fā)生密切相關。前期我們發(fā)現(xiàn)CK8可抑制TNFα誘導的NF-κB信號通路的活化,提示CK8是NF-κB通路的負調因子。本研究對CK8在負調控NF-κB通路中的作用及分子機制進行了深入研究,并探討其負調NF-κB通路所介導的生理病理學意義。
　　本文首先引進了

2、CK8-/-小鼠,并對其基因型及表達進行了鑒定。發(fā)現(xiàn)敲除CK8可導致小鼠發(fā)生嚴重的結腸炎伴隨結腸增生,同時多臟器出現(xiàn)炎細胞浸潤。同時,我們進一步利用CK8敲除小鼠從體內(nèi)水平驗證了CK8對NF-kB通路的負調控作用。利用AOM+DSS誘導的結腸癌模型,評價了CK8敲低小鼠在結腸癌發(fā)生中的作用,結果表明CK8敲低對誘導劑更加敏感,腸系膜淋巴結中CD4+CD69+T細胞比例明顯增多,提示CK8敲除可能在結腸癌發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。
　

3、　我們進一步對CK8負調控NF-κB信號通路的作用機制進行了深入研究。利用堿性磷酸酶報告基因實驗發(fā)現(xiàn)CK8可以劑量依賴的方式抑制TNFα誘導的NF-κB信號通路活化;CK8過表達可抑制TNFα誘導的IκBα磷酸化的影響;EMSA實驗證實CK8可降低NF-kB的DNA結合能力;RealtimePCR實驗證實過表達CK8抑制NF-κB下游靶基因如IL-1α的表達。此外,還發(fā)現(xiàn)CK8對Toll樣受體5(TLR5)的激動劑鞭毛蛋白CLB502誘

4、導的NF-κB活化也有明顯的抑制作用,并具有劑量依賴效應;進一步發(fā)現(xiàn)CK8對NF-κB通路的抑制作用發(fā)生在IKK復合體水平。我們還發(fā)現(xiàn)CK8可通過調控E3泛素連接酶對NEMO的泛素化修飾,進而實現(xiàn)對NF-κB的負調控作用。
　　為進一步探討CK8負調控NF-κB通路的作用機制,構建了人CK8RNAi慢病毒載體,為后續(xù)實驗奠定了基礎。為驗證CK8敲除小鼠表型的特異性,我們還進一步制備了小鼠CK8過表達慢病毒。
　　綜上,本研究