腺病毒載體介導(dǎo)的靶向性腫瘤基因治療研究.pdf

1、浙江大學醫(yī)學院博士學位論文腺病毒載體介導(dǎo)的靶向性腫瘤基因治療研究姓名：毛晨宇申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導(dǎo)教師：滕理送20090501浙江大學博l：學位論文中文摘要第一部分：雙重調(diào)控的靶向性腫瘤增殖腺病毒的構(gòu)建及抗瘤研究。本課題引入兩個在絕大多數(shù)腫瘤細胞中均高表達而在正常組織中低表達甚至不表達的腫瘤特異性啟動子人端粒酶催化亞單位啟動子和人環(huán)氧合酶一2啟動子來分別調(diào)控腺病毒早期必需基因E1A和E1B，使經(jīng)過改造的重組增殖腺病毒只能在同

2、時表達人端粒酶和人環(huán)氧合酶一2的細胞內(nèi)增殖并裂解該細胞，而在正常的細胞內(nèi)不能有效增殖。在本實驗中，通過將腺病毒穿梭質(zhì)粒載體pD306／H181一C409和骨架質(zhì)粒載體pBHGE3共轉(zhuǎn)染工具細胞Hek293，經(jīng)過在細胞內(nèi)隨機同源重組后，成功得到了一種新型的由人端粒酶催化亞單位啟動子和人環(huán)氧合酶一2啟動子共同調(diào)控的條件增殖型腺病毒Ad5HC。通過Westernblot法檢測表明EIA和E1B可在多種被Ad5HC作用后的腫瘤細胞中表達，而在正

3、常細胞中不表達；病毒增殖試驗表明Ad5一HC可在多種腫瘤細胞內(nèi)大量擴增，其擴增倍數(shù)是正常細胞的上萬倍；細胞殺傷試驗表明Ad5一HC對多種不同類型的腫瘤細胞有強大的殺傷效果；當Ad5HC聯(lián)合化療藥物作用于腫瘤細胞時，它能與包括5FU、表柔比星、紫杉醇在內(nèi)的多種化療藥物產(chǎn)生協(xié)同療效；裸鼠移植瘤抗瘤活性試驗表明Ad5HC在動物體內(nèi)能有效抑制瘤體的生長本實驗采用一系列體外試驗和體內(nèi)試驗，全面驗證了由hTERT啟動子和Cox2啟動子雙重調(diào)控的腫瘤

4、增殖腺病毒Ad5HC良好的腫瘤細胞特異性和細胞殺傷作用，從而為腫瘤的病毒基因治療提供了一種新的思路和方法。第二部分：由AFP啟動子調(diào)控且攜帶人工合成微小RNA的重組腺病毒的構(gòu)建及抗瘤研究本課題用人工合成的方式合成多段能直接靜默細胞正常新陳代謝所必需的基因的微小RNA序列，包括磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehydephosphatedehydrogenase，GAPDH)、真核起始因子4E(eukaryotictranslatio