EBOV GP蛋白單克隆抗體的制備及其在桿狀病毒中的表達研究.pdf

1、埃博拉病(EVD)，舊稱埃博拉出血熱(EHF)，是由絲狀病毒科的埃博拉病毒(EBOV)引起的一種出血性、類流感樣癥狀的人獸共患病。2014年，該病毒的扎伊爾型引起的西非埃博拉疫情，傳播疫區(qū)數(shù)和死亡人數(shù)都為史上最多。GP蛋白是埃博拉病毒的重要結(jié)構(gòu)蛋白，在病毒毒力、入侵、誘導中和抗體產(chǎn)生等方面發(fā)揮重要作用。本研究制備了埃博拉病毒GP蛋白的單克隆抗體，構(gòu)建了表達GP蛋白的重組桿狀病毒，并通過動物實驗對其免疫原性進行了研究，以期為埃博拉病毒的診

2、斷方法與疫苗研究奠定基礎。
　　具體內(nèi)容如下:
　　1.EBOV GP蛋白單克隆抗體的制備和鑒定
　　根據(jù)DNA Star分析，構(gòu)建能表達GP蛋白1-300個氨基酸的表達質(zhì)粒pKG-GP-300。在轉(zhuǎn)化、誘導表達、包涵體純化等步驟后，獲得純度較高的截短GP蛋白。通過BALB/c小鼠免疫，細胞融合，ELISA檢測，多次亞克隆篩選后，獲得能穩(wěn)定分泌特異性的抗EBOV GP蛋白單抗的雜交瘤細胞株，分別為:1C1、2A3、2G

3、7、2H9。其亞型和輕鏈均為IgG1、Kappa。經(jīng)IFA、Western Blot驗證，4株單抗均能與埃博拉病毒GP蛋白發(fā)生特異性反應。
　　2.表達GP蛋白的重組桿狀病毒構(gòu)建及其免疫原性研究
　　用含EBOV GP基因的質(zhì)粒作為模板，通過PCR擴增并將其克隆至轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pFAST-HT-B中。利用位點特異性轉(zhuǎn)座作用，獲取含GP基因和桿狀病毒基因組的質(zhì)粒。隨后轉(zhuǎn)染Sf9(Spodoptera frugiperda cell)