PPRV H蛋白的單克隆抗體制備與在桿狀病毒中的表達(dá).pdf

1、小反芻獸疫(PPR)，是由麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒(PPRV)感染引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病。該病是OIE規(guī)定的A類(lèi)疫病，我國(guó)規(guī)定的一類(lèi)動(dòng)物疫病。H蛋白是PPRV的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，具有血凝素和神經(jīng)氨酸酶活性，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，是疫苗和診斷試劑研發(fā)的重要靶標(biāo)。本研究制備了PPRV H蛋白的單克隆抗體，構(gòu)建了表達(dá)H蛋白的重組桿狀病毒，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)其免疫原性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，為建立PPRV的檢測(cè)方法和新型疫苗研究奠定了

2、基礎(chǔ)。具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　1.PPRV H蛋白單克隆抗體的制備及鑒定
　　將PPRVH基因克隆至原核表達(dá)載體pGEX-KG中，通過(guò)摸索蛋白最優(yōu)表達(dá)條件獲得純化蛋白pGEX-KG-PPRV-H，將此蛋白免疫BALB/c小鼠，通過(guò)細(xì)胞融合和間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)及亞克隆技術(shù)，篩選雜交瘤細(xì)胞株，得到4株可穩(wěn)定分泌抗PPRV H蛋白的特異性單克隆抗體，分別命名為:1C4、1D8、2A1和2E1。經(jīng)鑒定，IgG亞型均為IgG1，輕鏈

3、均為Kappa鏈。通過(guò)間接免疫熒光和Western Blot分析，證實(shí)了獲得的4株單抗均具有較好的特異性。
　　2.PPRV H蛋白在桿狀病毒中的表達(dá)及其免疫原性初步研究
　　將PPRV H基因克隆至供體質(zhì)粒PfastBac HTB中，將此重組供體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DH10bac，經(jīng)PCR驗(yàn)證，得到重組bacmid-PPRV-H。將重組bacmid-PPRV-H轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞，成功拯救出重組桿狀病毒Bacmid-PPRV-H。通過(guò)間接