葡萄糖對大鼠肝細胞白蛋白基因表達的影響.pdf

1、目的:首先觀察大鼠Ku0pffer細胞與肝實質(zhì)細胞體外共同培養(yǎng)時肝實質(zhì)細胞生長、形態(tài)及功能狀況，建立實驗細胞模型。進一步觀察不同濃度葡萄糖對大鼠肝細胞白蛋白基因表達的影響。 方法:(1)原位二步Ⅳ型膠原酶灌注法聯(lián)合Percoll液密度梯度離心法分離肝細胞與Kupffer細胞；體外進行肝細胞單獨培養(yǎng)、肝細胞與Kupffer細胞按6：1比例共同培養(yǎng)，觀察不同情況下肝細胞生存時間和形態(tài)，每隔24h檢測培養(yǎng)上清中白蛋白和ALT、AST的

2、水平，并在36h放免法檢測上清液TNF-α、IL-1、IL-6含量。(2)用終濃度分別為3.9mmol/L，7.Ommol/L，11. Immol/L，22.2 mmol/L的葡萄糖處理聯(lián)合培養(yǎng)體系，以3.9mmol/L組作為對照組，分別于4h、24h留取細胞上清液，全自動生化儀檢測白蛋白濃度，放免法檢測上清液TNF-α、IL-1、IL-6含量，提取肝細胞RNA及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法(RT-PCR)檢測白蛋白mRNA含量。 結(jié)果:(

3、1)單獨培養(yǎng)組肝細胞的生長、增殖迅速，并向正常肝細胞的形態(tài)演變，肝細胞可培養(yǎng)存活至15d；共同培養(yǎng)組肝細胞細胞生長增殖緩慢，細胞可培養(yǎng)存活至10d?；旌吓囵B(yǎng)組上清白蛋白水平在24、36、48、60h比單獨培養(yǎng)組低(t=2.980，3.139，2.551，2.605; p<0.05)；混合培養(yǎng)組上清ALT、AST水平在24、36、48、60h高于于單獨培養(yǎng)組(ALT t=3.055,2.666,2.824,3.108; p<0.05；AS

4、T t=2.632,2.446,3.090,2.895；p<0.05)，聯(lián)合培養(yǎng)組Kupffer細胞保持IL-1、IL-6和TNF-α分泌功能，而單獨培養(yǎng)組未檢測到IL-1、IL-6和TNF-α。(2)不同濃度葡萄糖處理肝細胞4h后，各組肝細胞上清中IL-1，IL-6，TNF水平與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義，與此同時，各組肝細胞上清中白蛋白水平與肝細胞白蛋白mRNA表達與對照組相比下降不明顯；而培養(yǎng)24h以后，各組肝細胞上清中IL-1，

5、IL-6，TNF水平與對照組相比上升明顯，并且，隨著葡萄糖濃度的增加肝細胞上清中IL-1，IL-6，TNF濃度不斷上升，并且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，各組肝細胞上清中白蛋白水平與肝細胞白蛋白mRNA表達與對照組相比下降明顯，呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，與肝細胞上清中IL-1，IL-6，TNF水平變化一致。 結(jié)論:(1)肝實質(zhì)細胞和Kupffer細胞在適宜的培養(yǎng)條件下可進行共同培養(yǎng)，kupffer細胞分泌細胞因子的功能和肝細胞白蛋白合成分泌功能保持