注射葡萄糖對(duì)軍曹魚(yú)糖代謝和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因表達(dá)的影響.pdf

1、魚(yú)類特別是肉食性魚(yú)類對(duì)糖類的利用能力低下，極大地限制了糖類作為廉價(jià)能源在飼料中的用量，如何提高魚(yú)類對(duì)飼料中糖類的利用已經(jīng)成為魚(yú)類營(yíng)養(yǎng)研究領(lǐng)域中的一個(gè)熱點(diǎn)話題。弄清魚(yú)類糖代謝機(jī)制非常有必要。本試驗(yàn)以軍曹魚(yú)（Rachycentroncanadum）為研究對(duì)象，研究注射葡萄糖對(duì)軍曹魚(yú)血漿生化指標(biāo)、肝/肌糖原、糖酵解酶活和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(glucose transporter，GLUT)表達(dá)的影響。
　　本試驗(yàn)選取體重約為85±3g的

2、軍曹魚(yú)作為研究對(duì)象，分成兩個(gè)試驗(yàn)組，分別腹腔注射0.68％的生理鹽水和60mg/100g體重的葡萄糖溶液，在注射后0、1、2、4、8、12、24和48h進(jìn)行采樣。結(jié)果表明:與對(duì)照組相比，葡萄糖注射組軍曹魚(yú)血糖及血漿甘油三酯和膽固醇均發(fā)生了顯著性變化(p＜0.05)，分別于注射后1h、8h和48h達(dá)到最大值，但血漿中總蛋白含量未受顯著影響。注射葡萄糖后，軍曹魚(yú)肝糖原呈先升后降趨勢(shì)，在8h達(dá)到最高水平(p＜0.05)，但肌糖原無(wú)明顯變化(p

3、＞0.05);血漿胰島素在2h達(dá)到最高峰值，隨后顯著下降(p＜0.05);丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)活性在注射之后4h達(dá)到最高水平(p＜0.05)，隨后下降，但己糖激酶(hexokinase，HK)和果糖-6-磷酸激酶（6-phosphofructokinase，PFK）活性并不受顯著影響(p＞0.05)。
　　軍曹魚(yú)GLUT家族成員GLUT4已經(jīng)被報(bào)道，本研究中新克隆獲得軍曹魚(yú)5個(gè)GLUT家族成員（GLU

4、T1、GLUT2、GLUT3、GLUT5及GLUT9）的cDNA片段。通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，新發(fā)現(xiàn)的5個(gè)GLUT成員在軍曹魚(yú)13個(gè)被檢組織中表達(dá)，其中，GLUT1在前腸組織中表達(dá)量最高，GLUT5在性腺中表達(dá)量最高，GLUT2、GLUT3和GLUT9均在幽門(mén)盲囊中表達(dá)量最高。分析注射葡萄糖對(duì)已知的6個(gè)GLUT家族基因在軍曹魚(yú)肝臟和肌肉中表達(dá)水平的影響發(fā)現(xiàn)，注射葡萄糖后，肝臟中GLUT2表達(dá)量發(fā)生顯著改變，24h時(shí)上升至最大值;與

5、對(duì)照組相比，GLUT3表達(dá)量在所有檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)均顯著升高;GLUT5表達(dá)量呈先上升后下降趨勢(shì)，在12h達(dá)到最大值，相較對(duì)照組上升了4.0倍。但是，GLUT1、GLUT4和GLUT9的表達(dá)量相較于對(duì)照組均無(wú)顯著改變。在肌肉中，注射葡萄糖僅對(duì)GLUT1和GLUT3的表達(dá)產(chǎn)生顯著影響。注射葡萄糖之后，肌肉GLUT1和GLUT3均呈先上升后下降趨勢(shì)，其中，GLUT1在2h時(shí)達(dá)到最大值，為對(duì)照組的2.1倍;GLUT3則在4h上升到最高值。
　

6、　為了深入研究GLUT在軍曹魚(yú)糖代謝中發(fā)揮的功能，本研究采用RACE-PCR技術(shù)，克隆獲得了GLUT1及GLUT2的基因全長(zhǎng)，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明，軍曹魚(yú)GLUT1基因cDNA序列全長(zhǎng)2531 bp（GenBank登錄號(hào):KU955598），其開(kāi)放閱讀框（Open Reading Frame，ORF）區(qū)長(zhǎng)1440bp，編碼479個(gè)氨基酸。GLUT2基因（GenBank登錄號(hào):KU955599）cDNA序列全長(zhǎng)1380bp，