肉仔雞氧化應(yīng)激模型的研究.pdf

1、本文首先研究了激素處理(注射或口服)對肉仔雞生產(chǎn)性能、消化能力、免疫功能和肉質(zhì)的影響,建立了急性和慢性動物營養(yǎng)應(yīng)激模型:研究了DEX對肌衛(wèi)星細胞的影響,建立了細胞氧化應(yīng)激模型;進一步研究了激素對衛(wèi)星細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響.研究表明,三種激素處理的應(yīng)激模型均能引起肉仔雞肉質(zhì)、激素、細胞活性等的變化,產(chǎn)生氧化應(yīng)激,激素可通過細胞內(nèi)鈣離子途徑的轉(zhuǎn)導(dǎo)引起肌肉細胞的代謝變化,從而影響肉質(zhì).本研究可為研究應(yīng)激對肉仔雞的影響及其機理提供方法學(xué)借鑒.現(xiàn)

2、摘要如下: 1、急性氧化應(yīng)激動物試驗?zāi)Ｐ偷难芯窟x擇2ld體重相近的健康肉仔雞公雛210只,隨機分成7組,每組3個重復(fù),每重復(fù)10只.處理分別為C(對照組)、S(生理鹽水注射1 mL/只)、s+R(s+Ru486)、D(6 mg/kg BW)、D+R(D+Ru486)、A(6 IU/kg.BW)、A+R(A+Ru486),Ru486劑量為50 mg/kg BW;40d時重復(fù)上述過程.結(jié)果表明: (1)注射ACTH、DEX和

3、PSS均顯著影響了肉品品質(zhì)(pH值降低、滴水損失和肉品剪切強度增加),同時注射Ru486后肉品質(zhì)的不正常狀況得到了緩解,但均未恢復(fù)到未注射狀態(tài);腿肌的pH值、滴水損失、剪切強度均顯著高于胸肌(P<0.01);29d屠宰的肉品pn值、滴水損失均顯著高于40d屠宰(P<0.01);40d屠宰雞肌肉的剪切強度顯著高于29d(P<0.01);隨著處理后屠宰時間的延長,肌肉pn值降低、滴水損失和剪切強度增加趨勢明顯.這些結(jié)果表明,40d肉仔雞,D

4、XM(6 mg/kg BW)或ACTH(6IU/kg BW)注射處理后8h,可用于模擬研究氧化應(yīng)激對肉質(zhì)的影響. (2)注射DEX、ACTH和PSS后組織(胸肌、腿肌、肝臟和心肌)勻漿中蛋白含量、MDA顯著或極顯著增加,GSH-Px和SOD顯著或極顯著降低;同時注射Ru486后這種組織的不正常氧化還原狀態(tài)得到緩解,GSH-Px和SOD顯著高于、蛋白含量和MDA顯著低于僅注射DEX、ACTH和生理鹽水組,但仍未恢復(fù)到對照組水平.注

5、射處理后4h、8h、12h和24h屠宰雞氧化還原狀態(tài)的測定結(jié)果表明,不同組織對同一指標(biāo)的反應(yīng)有別,以8h～12h為合適的激素處理后的作用時間.肌肉注射DEX和ACTH可用于模擬動物的急性組織氧化應(yīng)激狀態(tài). (3)注射DEX和ACTH后,與其它所有處理組相比,血液'FAOC、GSH-Px和SOD均降到了最低,顯著低于對照組(P<0.01),二者差異不顯著(P>0.05):CAT、MDA、CK和AfT則升到了最高,顯著高于對照組(P

6、<0.01),兩種處理差異不顯著(P>0.05).同時相應(yīng)注射Ru486后,血液TAOC、GSH-Px和SOD升高,血液CAT、MDA、CK和AST低,與相應(yīng)的不注射組均差異顯著(P<0.01),但仍高(TAOC、MDA、CK和AST)或低于(GSH-Px、SOD、CAT)對照組(P<0.01). 2、慢性氧化應(yīng)激動物試驗?zāi)Ｐ偷难芯窟x擇320只21dAA肉仔雞隨機分為4個處理組,每組設(shè)8個重復(fù),每個重復(fù)10只試雞.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ

7、組分別飲用加有0、10、20和30 mg/L 的可的松水,自由飲水和采食,試驗期10d.結(jié)果表明: (1) 可的松飲水對肉雞FC、ADG、F/G均無顯著影響(P>0.05):血液生化分析表明,可的松飲水對血液HDL、LDL、CHOL、TG、肌酐含量無顯著影響(P>0.05),但20和30mg/L可的松飲水10d肉雞血漿TP含量(P<0.05)和尿酸含量(P<0.01)顯著升高,30mg/L 可的松飲水1d血漿AST活性顯著升高(

8、P<0.05).20和30mg/L可的松飲水組,顯著降低了3～4d日糧CP、EE表觀代謝率,顯著降低了1～2、3～4d的.Ash的表觀代謝率(P<0.05).結(jié)果表明,20和30mg/L可的松飲水,在飲水的第3～4d即影響到了日糧CP、EE和灰分的消化率,10d時血液TP、尿酸含量升高. (2) 可的松飲水極顯著地(P<0.01)增加了胸肌、腿肌6d和lOd的滴水損失;顯著升高了胸肌pH1(P<0.05),對腿肌無顯著影響;pH

9、24.胸肌除3d第Ⅱ組顯著增加外(P<0.05),其他均無明顯變化(P>0.05),但腿肌有增加的趨勢(P>0.05);可的松飲水對胸肌、腿肌的相對重量無顯著影響(P>0.05):對胸肌含水量亦無顯著影響(P>0.05),胸肌蛋白有降低的趨勢,顯著降低了2、6d胸肌脂肪含量(P<0.05),可的松飲水顯著降低了腿肌6d第Ⅲ組水分含量(P<0.05),極顯著降低了6d第Ⅱ、Ⅲ組蛋白的含量(P<0.01),顯著降低了2d第Ⅲ組和6dⅡ、Ⅲ組

10、脂肪含量(P<0.05).這表明可的松飲水對肌肉發(fā)育的影響不顯著,但顯著影響肌肉的營養(yǎng)組成. (3) 處理3d,第Ⅳ組雞皮質(zhì)酮含量顯著高于對照組(P<0.05):血糖濃度在處理1-2d明顯升高,處理2d顯著(P<0.05)高于對照組;T<,3>先降低后升高,1～2d均極顯著高于(P<0.01) 對照組,第3d T<,4>極顯著(P<0.01)高于對照組;對應(yīng)激氧化狀態(tài)的影響為,MDA在1～3d和6d時均顯著(P<0.05)高于對

11、照組,SOD第1～3d活性降低,GSH-Px活性處理后1～3d均顯著(P<0.05)低于對照組,TAOC第2d顯著降低(P<0.05),CK在第6d時顯著升高 (P<0.05).這表明30mg/L 可的松飲水3d成功地在肉雞體內(nèi)誘發(fā)了氧化應(yīng)激. (4) 整個試驗期,可的松飲水對心臟、肝臟、胸腺、法氏囊的相對重量均無明顯影響(P>0.05):對脾臟相對重量的影響,除第2d顯著差異外(P<0.05),對其他時間均無顯著影響(P>0.

12、05);可的松飲水對腹脂和肝臟含水量均無顯著影響(P>0.05),肝臟脂肪含量在試驗處理10d左右極顯著增加(P<0.01);可的松飲水顯著增加了試驗處理2～3d心臟MDA含量,降低了第10d MDA含量(P<0.05),極顯著增加了(P<0.01)處理第1d后GSH-Px含量,降低了處理1d后SOD含量(P<0.05);可的松飲水顯著增加了試驗處理2～3d肝臟MDA含量,處理10d時處理劑量最小的第Ⅱ組MDA含量顯著高于對照組,對GS

13、H-PX、SOD的含量的影響明顯,除處理第6d時顯著高于對照組外,在整個試驗期內(nèi)均顯著低于對照組.這表明可的松飲水對組織器官發(fā)育的影響較小,而1～3d對心、肝臟的過氧化狀態(tài)影響顯著. 3、肌肉細胞氧化應(yīng)激模型的研究用顯微鏡(觀察細胞形態(tài)、活細胞個數(shù)、臺盼藍染色)、MTT試驗、NBT還原試驗、脂質(zhì)過氧化等試驗,研究了不同濃度DEX對細胞活性的的影響,并用維生素C(VC)對此模型進行了驗證,結(jié)果表明: (1)顯微鏡下可明顯看

14、出,活性SCs隨DEX濃度的增加而減少明顯,DEX濃度大于0.625g/L.幾乎未見活的SCs存在;DEX濃度小于0.15625 g/L則對SCs的影響較小,腿肌SCs的抗DEX的能力較大. (2)隨著DEX濃度的增加,培養(yǎng)基中的活細胞個數(shù)顯著減少,臺盼藍藍染率顯著增加,且兩項指標(biāo)均與DEX濃度呈一定的函數(shù)關(guān)系(活細胞數(shù)(Y×10<'4>)=35.186e<'-0.7821x>;細胞藍染率(死亡率,Y,﹪)=44.039X<'-

15、0.3492>,X為DEX濃度(g/L,).細胞培養(yǎng)液中添加DEX顯著影響了胸肌和腿肌SCs的相對存活率,隨DEX濃度增加,細胞存活性呈冪函數(shù)曲線降低(胸肌:y=14.944X<'-0.6082>;DEX+VC:y=19.642X<'-0.4663>;腿肌:y=17.091X<'-0.5193>;DEX+VC:y=40.418X<'-0.2536>;其中X為DEX劑量(g/L)、Y為SCs相對成活率(﹪)). (3)DEX處理增

16、加了肌肉細胞的膜脂質(zhì)過氧化作用,使膜系統(tǒng)受到不同程度的過氧化損傷;肌細胞MDA相對生成量(Y)與DEX(x,g/L)之間呈冪函數(shù)關(guān)系:胸肌SCs Y=1.5723x<'0.0983>;腿肌SCs Y=1.3213x<'0789>.隨DEX濃度的增加(x,g/L),校正后的NBT被還原量(Y,吸光度值)顯著增加,說明氧自由基量增加明顯,自由基隨DEX濃度升高而升高,二者呈冪函數(shù)關(guān)系(胸肌和腿肌分別為:Y=0.8328x<'0.457>和Y

17、=0.3898x<'0.334>). (4)培養(yǎng)基中添加維生素C改善了肌肉細胞的存活率,隨DEX濃度增加,維生素C的改善作用降低. 4、DEX對雞胸、腿肌衛(wèi)星細胞中Ca<'2+>影響用LEICA TCS SP2 SE激光掃描共聚焦顯微鏡(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM簡稱共焦顯微鏡)和鈣離子指示劑Fluo-3/AM標(biāo)記技術(shù)測定了單個細胞內(nèi)鈣離子濃度在不同濃度DEX處理后細胞

18、內(nèi)的動態(tài)變化,以便確定DEX能否激發(fā)鈣離子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng),結(jié)果表明:用不同濃度.DEX處理胸肌和腿肌SCs,細胞內(nèi)游離鈣離子濃度均有相應(yīng)的變化,隨著DEX濃度的降低,兩種來源的SCs內(nèi)鈣離子濃度的最大值逐漸降低,達到最大值需要的時間不斷延長,細胞內(nèi)鈣離子濃度恢復(fù)到靜止?fàn)顟B(tài)需要的時間延長:胸肌SCs對DEX處理的反應(yīng)更為敏感;10<'-4>～10<'-6>mol/L DEX均能引起肌細胞內(nèi)鈣離子濃度增加;細胞外DEX可以通過作用于肌肉細胞內(nèi)