刺參（Apostichopus japonicus）的遺傳學研究.pdf

1、1.刺參EST-SSR分子標記的開發(fā)與評價利用公共數(shù)據(jù)庫資源，在刺參EST數(shù)據(jù)庫中查找包含微衛(wèi)星的序列，開發(fā)了11個EST-SSR分子標記，并用采自煙臺的30個刺參個體進行評價。所有位點的等位基因數(shù)目范圍為3-10個。期望和觀測雜合度值范圍分別為0.378-0.870和0.077-0.690。11個位點中有8個位點由于純合子過剩而顯著偏離哈迪-溫伯格平衡，說明可能有大量的無效等位基因的存在。11個EST-SSR標記的開發(fā)，為刺參群體遺傳

2、以及比較基因組學研究提供了有力的遺傳工具。 2.刺參養(yǎng)殖和野生群體的遺傳多樣性研究利用8對微衛(wèi)星引物對中國北方5個刺參養(yǎng)殖群體和2個野生群體進行遺傳多樣性分析。在8個位點中均檢測到了很高的多態(tài)性。7個群體的平均等位基因數(shù)和期望雜合度分別為10.4-12.3和0.735-0.783。結果顯示目前中國北方養(yǎng)殖刺參與野生刺參相比，遺傳多樣性水平并沒有出現(xiàn)顯著的降低。說明經過20多年的養(yǎng)殖過程，中國北方的養(yǎng)殖刺參群體依然保持了較高的遺傳

3、多樣性。由于地理的隔離和養(yǎng)殖模式的影響，大部分養(yǎng)殖和野生群體之間已經出現(xiàn)了明顯的遺傳分化：Fst值范圍為0.008-0.036，兩個野生群體之間還沒有產生顯著的遺傳分化(Fst=0.008)。研究結果為刺參養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性保護以及選擇育種研究提供了重要的參考數(shù)據(jù)。 3.刺參遺傳連鎖圖譜的構建用21個微衛(wèi)星標記、37對AFLP標記，利用親本和88個子代個體構建第一張刺參的遺傳連鎖圖譜。除去偏分離標記，利用其它有效標記分別構建了

4、刺參的雌性和雄性連鎖圖譜。雌性框架圖譜有141個標記定位在17個連鎖群上，覆蓋基因組的長度為1291cM，平均間隔為10.4 cM；雄性框架圖譜有125個標記定位于18個連鎖群上，覆蓋基因組945.7 cM，平均間隔8.8 cM。刺參雌、雄框架圖的覆蓋率分別為77.6％和74.4％。該圖譜的建立為進一步開展刺參QTL分析以及分子標記輔助育種奠定的基礎。 4.刺參線粒體遺傳模式的研究為了研究線粒體在刺參中的遺傳規(guī)律，對20組刺參家

5、系親本線粒體COI基因進行擴增，得到約540bp的片段。通過DGGE電泳技術從中篩選出5組親本間存在差異的組合，將每組2個親本和20個子代放在一起進行DGGE電泳分析，對其遺傳模式進行探討。結果顯示在來自這5組家系的100個后代中僅檢測到母本的單倍型，刺參的線粒體遺傳模式表現(xiàn)為典型的母系遺傳。 5.4種海參16S rRNA和COI基因片段序列比較及系統(tǒng)學研究采用PCR技術對山東榮成、長島、俄羅斯和日本的刺參(Apostichop

6、us japonicus)，黃乳海參(Holothuria fuscogilva)，北大西洋瓜參(Cucumaria frondosa)，二色桌片參(Mensamaria intercedens)的16S rRNA和COI基因片段進行了擴增和測序，分別得到了長度約為500 bp和540 bp的片段。通過統(tǒng)計變異位點，平均核苷酸差異數(shù)，核苷酸多樣性指數(shù)進行基因序列變異分析。結果表明，在16S rRNA、COI基因片段中，長島和榮成刺參序列