刺參(Apostichopus japonicus Selenka)高效免疫增強(qiáng)劑的篩選與應(yīng)用.pdf

1、本文選擇我國(guó)北方海參養(yǎng)殖的主要種類刺參(Apostichopus.japonicus Selenka)為研究對(duì)象,通過(guò)一系列在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中開(kāi)展的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn),探討了在刺參基礎(chǔ)飼料中分別添加具有免疫促進(jìn)作用的營(yíng)養(yǎng)素(維生素C和維生素E)、多糖(β-葡聚糖)、低聚糖(低聚果糖、甘露寡糖)以及微生態(tài)制劑(枯草芽孢桿菌、硒酵母、酵母培養(yǎng)物)對(duì)刺參生長(zhǎng)、免疫及抗病力的影響。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　 1.以初始體重為(5.08±0.08

2、)g的健康刺參(Apostichopus japonicus Selenka)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用3×3雙因子設(shè)計(jì),在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、500和2000 mg kg-1包膜維生素C,每種維生素C水平分別添加0、625和1250 mg kg-1β-葡聚糖,共制成9種實(shí)驗(yàn)飼料,在室內(nèi)水循環(huán)系統(tǒng)中進(jìn)行了為期9周的飼喂實(shí)驗(yàn),探討了飼料中不同含量的維生素C和β-葡聚糖對(duì)刺參生長(zhǎng)性能、免疫力和抗病力的影響。研究結(jié)果表明:維生素C和β-葡聚糖對(duì)刺參的

3、特定生長(zhǎng)率都有顯著影響,且同時(shí)添加高劑量維生素C和β-葡聚糖的實(shí)驗(yàn)組刺參的特定生長(zhǎng)率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);維生素C和β-葡聚糖對(duì)刺參體腔細(xì)胞的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性均有顯著影響(P＜0.05),當(dāng)飼料中不添加維生素C時(shí),β-葡聚糖的添加顯著增強(qiáng)了刺參的呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性(P＜0.05),當(dāng)飼料中只添加500mgkg-1維生素C時(shí),添加625mg kg-1 的β-葡聚糖可以增

4、強(qiáng)顯著刺參的吞噬活性和酚氧化酶活性(P＜0.05),而添加1250mg kg-1的β-葡聚糖可以顯著增強(qiáng)刺參的呼吸爆發(fā)活性和酸性磷酸酶活性(P＜0.05)。當(dāng)飼料中添加2000mg kg-1維生素C時(shí),添加625mgkg-1的β-葡聚糖可以顯著增強(qiáng)刺參的酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性(P＜0.05),而添加1250mg kg-1的β-葡聚糖可以顯著增強(qiáng)刺參的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性(P＜O.05)。飼料中不同濃

5、度的β-葡聚糖對(duì)刺參感染燦爛弧菌后的累積死亡率有顯著影響(P＜0.05),當(dāng)飼料中添加500mg kg-1和2000mg kg-1的維生素C時(shí),隨著飼料中β-葡聚糖含量的升高,刺參的累積死亡率呈下降的趨勢(shì),尤其飼料中添加500mg kg-1維生素C和高水平的β-葡聚糖(1250mg kg-1)的實(shí)驗(yàn)組顯著降低了刺參感染燦爛弧菌14d內(nèi)的累積死亡率(P＜0.05)。在本實(shí)驗(yàn)條件下,維生素C和β-葡聚糖對(duì)刺參體腔細(xì)胞的吞噬活性和呼吸爆發(fā)活性

6、存在顯著的交互作用(P＜0.05)。
　　 2.以初始體重為(5.09±0.03)g的刺參(Apostichopus japonicus Selenka)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,在室內(nèi)水循環(huán)系統(tǒng)中進(jìn)行了為期9周的飼喂實(shí)驗(yàn),探討了飼料中不同含量的維生素C(包膜維生素C)和維生素E(α-生育酚醋酸酯)對(duì)刺參生長(zhǎng)性能、免疫力以及抗病力的影響。本實(shí)驗(yàn)采用3×3雙因子實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、500和2000mgkg-1的維生素C,每種維生素

7、C水平分別添加0、80和250mg kg-1的維生素E,共制成9種實(shí)驗(yàn)飼料,每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。研究結(jié)果表明,維生素C和維生素E對(duì)刺參特定生長(zhǎng)率均有顯著影響(P＜0.05),且當(dāng)飼料中不添加維生素C或添加2000mgkg-1維生素C時(shí),添加250mg kg-1的維生素E實(shí)驗(yàn)組刺參的特定生長(zhǎng)率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);維生素C和維生素E對(duì)刺參體腔細(xì)胞的吞噬活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性都有顯著的影響(P＜0.05),當(dāng)飼料中單獨(dú)添

8、加維生素C時(shí),刺參的吞噬活性隨著維生素C添加量的增加有上升的趨勢(shì),且2000mg kg-1維生素C添加組刺參的吞噬活性顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。當(dāng)飼料中不添加維生素C時(shí),添加250mg kg-1的維生素E實(shí)驗(yàn)組刺參的吞噬活性顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。當(dāng)飼料中添加添加500 mg kg-1維生素C時(shí),刺參的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性和酚氧化酶活性隨著飼料中維生素E的添加有上升的趨勢(shì),且添加250 mg kg-1的維生素E實(shí)驗(yàn)組刺參

9、的酚氧化酶活性顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。當(dāng)飼料中添加2000 mg kg-1維生素C時(shí),刺參的呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性隨著飼料中維生素E的添加有上升的趨勢(shì),且添加250mg kg-1的維生素E實(shí)驗(yàn)組刺參的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性都顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。飼料中不同濃度的維生素E對(duì)刺參感染燦爛弧菌后的累積死亡率有顯著影響(P＜0.05),在任何維生素C添加水平下,隨著飼料中維生素

10、E含量的升高,刺參的累積死亡率呈下降趨勢(shì),尤其飼料中同時(shí)添加高劑量的維生素C(2000mg kg-1)和維生素E(250 mg kg-1)的實(shí)驗(yàn)組顯著降低了刺參感染燦爛弧菌14d內(nèi)的累積死亡率(P＜0.05)。在本實(shí)驗(yàn)條件下,維生素C和維生素E對(duì)刺參體腔細(xì)胞的吞噬活性表現(xiàn)出顯著的交互作用(P＜0.05)。
　　 3.以初始體重為(5.06±0.10)g的刺參(Apostichopus japonicus Selenka)為實(shí)驗(yàn)對(duì)

11、象,在室內(nèi)水循環(huán)系統(tǒng)中進(jìn)行了為期8周的飼喂實(shí)驗(yàn),探討了飼料中不同含量的低聚果糖和枯草芽孢桿菌對(duì)刺參生長(zhǎng)性能、免疫力、腸道菌群以及抗病力的影響。本實(shí)驗(yàn)采用3×3雙因子實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、0.2％和0.5％的枯草芽孢桿菌,每種枯草芽孢桿菌水平分別添加0％、0.25％和0.5％的低聚果糖(有效含量為95％),共制成9種實(shí)驗(yàn)飼料,每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)。研究結(jié)果表明,當(dāng)不添加低聚果糖時(shí),0.2％枯草芽孢桿菌顯著提高了刺參的特定生長(zhǎng)率(S

12、GR)和刺參體腔細(xì)胞吞噬活性(P＜0.05),顯著降低了刺參感染燦爛弧菌后的累積死亡率(P＜0.05)。當(dāng)不添加枯草芽孢桿菌時(shí),刺參SGR、PO和吞噬活性隨著低聚果糖的添加而升高,且飼料中添加O.5％低聚果糖時(shí),刺參體腔細(xì)胞破碎液中吞噬活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性都顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),當(dāng)飼料中枯草芽孢桿菌含量為0.2％時(shí),0.5％低聚果糖可以顯著提高刺參的特定生長(zhǎng)率、吞噬活性、PO活性(P＜0.05),顯著降低刺參腸道

13、弧菌數(shù)及刺參感染燦爛弧菌后的累積死亡率(P＜0.05);當(dāng)飼料中枯草芽孢桿菌含量為0.5％時(shí),0.25％低聚果糖添加組顯著提高了刺參的酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性(P＜0.05),降低了刺參感染細(xì)菌后14d內(nèi)的累積死亡率(P＜0.05)?？莶菅挎邨U菌和低聚果糖對(duì)刺參的吞噬活性、酚氧化酶活性、弧菌數(shù)目以及抗病力產(chǎn)生了明顯的交互作用(P＜0.05)。
　　 4.以初始體重(3.04±0.01)g的刺參(Apostichopus ja

14、ponicus Selenka)為研究對(duì)象,探討飼料中添加低聚果糖或甘露寡糖對(duì)其生長(zhǎng)、腸道菌群和非特異性免疫力的影響。分別向基礎(chǔ)飼料中添加0％(對(duì)照組)、0.25％和0.5％低聚果糖或甘露寡糖,配制出5種實(shí)驗(yàn)飼料,在室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)中進(jìn)行為期8周的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)。每種飼料為一處理,每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)缸(501)為一重復(fù)放養(yǎng)22頭刺參。飼喂實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定實(shí)驗(yàn)刺參的生長(zhǎng)及相關(guān)的免疫學(xué)指標(biāo),同時(shí)每個(gè)重復(fù)取13頭刺參進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明:(1)

15、0.5％低聚果糖組刺參的特定生長(zhǎng)率(SGR)顯著高于對(duì)照組p＜0.05),但與0.25％低聚果糖組差異不顯著(P>0.05);刺參腸道總菌數(shù)不受低聚果糖添加量的影響,但是兩低聚果糖組刺參腸道中的弧菌數(shù)顯著低于對(duì)照組(P＜0.05);隨著飼料中低聚果糖含量的升高,刺參體腔細(xì)胞的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性、體腔細(xì)胞上清中的PO活性和ACP活性都有升高的趨勢(shì);攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,O.5％低聚果糖組刺參感染燦爛弧菌(V.splendidus)14d的

16、死亡率顯著低于對(duì)照組(P＜0.05);(2)飼料中甘露寡糖含量對(duì)刺參的SGR影響不顯著(P>0.05);飼料中添加甘露寡糖可以提高刺參腸道中的總菌數(shù),降低腸道中的弧菌數(shù),0.25％和0.5％甘露寡糖組刺參腸道中的總菌數(shù)均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),但只有0.5％甘露寡糖添加組刺參腸道中的弧菌數(shù)顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。0.25％甘露寡糖組刺參體腔細(xì)胞吞噬活性和呼吸爆發(fā)活性顯著高于其他兩組(P＜0.05);隨著飼料中甘露寡糖添加

17、量的升高,刺參體腔細(xì)胞上清中的酚氧化酶(PO)活性和酸性磷酸酶(ACP)活性都有升高的趨勢(shì),但是各處理組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。0.25％甘露寡糖組刺參感染燦爛弧菌14d的累積死亡率顯著降低(P＜0.05);(3)綜上所述,飼料中分別添加0.5％的低聚果糖或者0.25％的甘露寡糖對(duì)刺參生長(zhǎng)、免疫力和抗病力的效果較好。二者均可以作為安全高效的口服免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于刺參的養(yǎng)殖生產(chǎn)。
　　 5.以初始體重為(3.52±0.08)

18、g的刺參(Apostichopus japonicus Selenka)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,在室內(nèi)水循環(huán)系統(tǒng)中進(jìn)行了為期8周的飼喂實(shí)驗(yàn),探討了飼料中不同含量的硒酵母和維生素E(VE)對(duì)刺參生長(zhǎng)性能、免疫力以及抗病力的影響。本實(shí)驗(yàn)采用2×4雙因子實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),在基礎(chǔ)飼料中分別添加0和250mg kg-1的VE,每種VE水平分別添加O、100、300和600mg kg-1的硒酵母,共制成8種實(shí)驗(yàn)飼料,每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。研究結(jié)果表明,硒酵母和維生素E對(duì)刺

19、參的特定生長(zhǎng)率均有顯著影響,飼料中添加硒酵母和維生素E的不同配伍均可顯著提高刺參特定生長(zhǎng)率(P＜0.05),高劑量硒酵母(600mg kg-1)和維生素E(250mg kg-1)添加組刺參的特定生長(zhǎng)率最高;當(dāng)飼料中不添加維生素E時(shí),隨著硒酵母添加量的增加,刺參的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性呈劑量依賴性升高,且600mg kg-1硒酵母添加組刺參的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性、酚氧化酶活性和酸性磷酸酶活性均顯著高于對(duì)照組

20、(P＜0.05)。當(dāng)飼料中添加250mg kg-1的維生素E時(shí),添加600mg kg-1硒酵母實(shí)驗(yàn)組刺參的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性和酚氧化酶活性高于其他各處理組,并顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);維生素E對(duì)過(guò)氧化氫酶活性(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性都有顯著的影響(P＜0.05),而硒酵母僅對(duì)SOD和GSH-Px活性影響顯著(P＜0.05),且二者合用對(duì)刺參的SOD和GSH-Px活性有顯著

21、的交互作用(P>0.05);當(dāng)飼料中不添加維生素E時(shí),飼料中單獨(dú)添加硒酵母可以降低刺參感染燦爛弧菌后的14d內(nèi)的累積死亡率,且隨著添加量的增加刺參的累積死亡率有下降的趨勢(shì)(P>0.05)。當(dāng)飼料中添加添加250 mg kg-1的維生素E時(shí),各水平硒酵母添加組的刺參感染燦爛弧菌后14d的累積死亡率顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。其中同時(shí)添加600 mg kg-1硒酵母和250 mg kg-1的維生素E的實(shí)驗(yàn)組顯著提高了刺參的特定生長(zhǎng)率、非

22、特異性免疫力和抗氧化酶活力,顯著降低了刺參感染燦爛弧菌后的累積死亡率,表現(xiàn)出較好的復(fù)合益生效果,是本研究最優(yōu)的功能組合。
　　 6.以初始體重為(3.49±0.06)g的刺參(Apostichopus japonicus Selenka)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,在室內(nèi)水循環(huán)系統(tǒng)中進(jìn)行了為期8周的飼喂實(shí)驗(yàn),探討了飼料中不同含量的酵母培養(yǎng)物(達(dá)農(nóng)威益康XP)和枯草芽孢桿菌對(duì)刺參生長(zhǎng)性能、免疫力、腸道菌群以及抗病力的影響。本實(shí)驗(yàn)采用2×4.雙因子

23、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),在基礎(chǔ)飼料中分別添加0和0.2％的枯草芽孢桿菌,每種枯草芽孢桿水平分別添加0、0.1％、0.2％和0.4％的酵母培養(yǎng)物,共制成8種實(shí)驗(yàn)飼料,每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)。研究結(jié)果表明,當(dāng)不添加枯草芽孢桿菌時(shí),酵母培養(yǎng)物顯著提高了刺參的吞噬活性、呼吸爆發(fā)活性、ACP和SOD活性(P＜0.05),顯著降低了刺參感染燦爛弧菌14d內(nèi)的累積死亡率(P＜0.05);當(dāng)添加O.2％的枯草芽孢桿菌時(shí),酵母培養(yǎng)物添加組的刺參特定生長(zhǎng)率、腸道總菌數(shù)、呼吸爆