貓人參總皂苷對小鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用和對肝癌細胞周期的影響.pdf

1、一、研究背景: 肝癌嚴重威脅著人類的健康，2004年全世界約有61萬人死于肝癌。中國是肝癌的高發(fā)地區(qū)。目前，手術(shù)治療仍是其主要治療手段，但是術(shù)后易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，以及較多肝癌病人確診時已不具備手術(shù)指征等問題，使得單純的手術(shù)治療不能滿足現(xiàn)階段的肝癌治療。中醫(yī)藥對腫瘤的治療有著悠遠的歷史，獨特的優(yōu)勢，并取得了顯著的效果。中藥有效成分的分離以及藥理作用研究是目前研究中藥治療腫瘤的一個重要途徑。 貓人參為江浙地區(qū)地方習(xí)用抗腫瘤藥物，

2、臨床廣泛運用于肺癌和消化道腫瘤的治療。貓人參植物中含20種無機元素，根莖部位含有豐富的氨基酸，乙醇提取物含有兒茶類、三萜類等成分。近期研究表明，從貓人參中提取分離的蒽醌類復(fù)合物能夠抑制小鼠肝癌皮下移植瘤的生長。本課題在前期相關(guān)工作的基礎(chǔ)上，進一步觀察貓人參總皂苷對肝癌體內(nèi)體外生長的抑制作用，初步探討其作用機制。 二、研究目的: (一)觀察貓人參總皂苷對小鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用。 (二)觀察貓人參總皂苷對肝癌細

3、胞周期的影響。 三、研究方法: 第一部分：貓人參總皂苷對肝癌體內(nèi)生長抑制作用的實驗研究 1、建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型，隨機分組，規(guī)律給藥。稱取各組小鼠實驗前后體質(zhì)量，測量瘤體體積，稱取瘤質(zhì)量。 2、腫瘤組織免疫組化染色，運用IMS醫(yī)學(xué)圖象定量分析軟件檢測腫瘤組織TUNEL的表達情況。 第二部分：貓人參總皂苷對肝癌細胞體外作用的實驗研究 1、四氮唑鹽還原法(MTT法)和臺盼藍染色細胞計數(shù)法

4、檢測不同濃度貓人參總皂苷作用48h對人肝癌細胞BEL-7402和小鼠肝癌細胞H22，細胞的增殖抑制率。 2、流式細胞儀(FCM)采用PI染色方法檢測不同濃度貓人參總皂苷作用48h對人肝癌細胞BEL-7402，小鼠肝癌細胞H22細胞周期的影響。 3、采用Western blot方法檢測貓人參總皂苷作用48h對人肝癌細胞BEL-7402細胞周期相關(guān)蛋白以及激酶的變化。 四、研究結(jié)果: 第一部分：貓人參總皂苷對

5、肝癌體內(nèi)生長抑制作用的實驗研究 1、各組之間小鼠體質(zhì)量無明顯差異；高、低劑量給藥組瘤體體積和瘤質(zhì)量均明顯低于陰性對照組，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；高、低劑量給藥組的抑瘤率分別為53.2％和43.5％。 2、給藥組TUNEL陽性表達率高于陰性對照組(P＜0.05)。 第二部分：貓人參總皂苷對肝癌細胞體外作用的實驗研究 1、貓人參總皂苷濃度在0.75-3 mg/ml時對人肝癌細胞BEL-7402和小鼠

6、肝癌細胞H22具有細胞毒作用。 2、貓人參總皂苷作用于人肝癌BEL-7402細胞，在給藥濃度0.1 mg/ml，0.2 mg/ml和0.4 mg/ml時隨濃度增加S期的比例明顯增加，其他兩期比例減少；貓人參總皂苷作用于小鼠肝癌細胞H22在給藥濃度為0.1 mg/ml，0.2 mg/ml和0.4 mg/ml時隨濃度增加G0/G1期和G2/M期的比例明顯增加，S期比例減少。3、貓人參總皂苷根據(jù)給藥濃度的增加人肝癌BEL-7402細胞

7、周期相關(guān)蛋白Cyclin A的表達上調(diào)；Cdk2無明顯變化。 五、研究結(jié)論: (一)貓人參總皂苷能夠抑制小鼠肝癌皮下移植瘤的生長，其作用機制之一可能是誘導(dǎo)移植瘤細胞凋亡。 (二)貓人參總皂苷在濃度為0.75-3 mg/ml時通過細胞毒作用抑制人肝癌細胞BEL-7402和小鼠肝癌細胞H22的增殖，在濃度低于0.75 mg/ml時可將細胞BEL-7402和H22周期分別阻滯在S期和G0/G1，G2/M期，其對BEL-