草甘膦對煙草超微結(jié)構(gòu)的影響及煙草EPSPS Ⅰ基因克隆.pdf

1、5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶(5-enolpyruvlyshikimate-3-phyosphate synthase，簡稱EPSPS)是由EPSPS基因編碼的、存在于植物及細菌真菌莽草酸途徑中的一種關(guān)鍵酶，它能催化植物及細菌真菌體內(nèi)5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸(5-enolpymvlyshikimare-3-phyosphate，簡稱EPSP)的生物合成，進而形成一些生命活動的重要代謝中間產(chǎn)物。草甘膦是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應用廣泛的

2、非選擇性除草劑，它專一性抑制EPSPS活性，從而影響磷酸烯醇式丙酮酸(phosphoenol-pyruvate，簡稱PEP)與莽草酸-3-磷酸(shikimate-3-phyosphate，簡稱S3P)結(jié)合生成植物及細菌真菌生長所需EPSP，阻斷芳香族氨基酸和一些芳香化合物的生物合成。EPSPS對草甘膦抗性的獲得可通過EPSPS基因過量表達、EPSPS基因點突變降低EPSPS對草甘膦的活性以及引入解毒酶基因。 本文主要進行了3個

3、方面的研究：第一，研究了草甘膦對煙草葉片超微結(jié)構(gòu)的影響，進一步探討草甘膦與EPSPS的作用機制；第二，克隆了煙草EPSPS I基因CDS序列；第三，優(yōu)化了煙草愈傷組織培養(yǎng)體系，所獲結(jié)果如下： 1、用30 mmol/L草甘膦處理煙草葉片2h、6h、12h、24h和48h后，分別取樣和拍照，與對照進行比較，結(jié)果顯示處理12 h內(nèi)煙草葉片外表無明顯變化；24和48h后葉片黃化，并出現(xiàn)壞死。對各處理時期煙草葉片超微結(jié)構(gòu)研究顯示，草甘膦處