葉下珠化學(xué)成分分離和藥理作用的研究.pdf

1、本課題主要目的是探討利用高速逆流色譜分離純化，高效液相分析分離物，以建立一種污染少的、高回收的、高效率的技術(shù)流程．對葉下珠的一般藥理作用進(jìn)行研究，以期為葉下珠的開發(fā)應(yīng)用進(jìn)一步提供理論依據(jù)。課題的主要內(nèi)容分為以下幾個部分： 1．HSCCC分離純化葉下珠的化學(xué)成分目的：利用高速逆流色譜分離純化葉下珠的化學(xué)成分．方法：通過薄層色譜法觀察目標(biāo)物在兩相間的分配，初選HSCCC溶劑系統(tǒng)，再通過分析型HSCCC選定溶劑系統(tǒng)：氯仿-甲醇-水，最

2、后通過調(diào)整速度進(jìn)行制備性分離。結(jié)果：在分析型HSCCC上，進(jìn)樣150mg乙酸乙酯部分萃取物，溶劑系統(tǒng)氯仿．甲醇．水(4:3:2)，一次分離到2mg純度為80.7％的目標(biāo)物1。進(jìn)樣150mg水部分萃取物，溶劑系統(tǒng)氯仿-甲醇-水(4:3.5:2)，一次分離到1.8mg純度為90.2％的目標(biāo)物2。目標(biāo)物1和目標(biāo)物2都能在制備型HSCCC上分離。結(jié)論：運用該溶劑系統(tǒng)從葉下珠的乙酸乙酯和水萃取部分一次性分離得到預(yù)想的目標(biāo)物。 2．葉下珠提

3、取物的體外抑茵試驗?zāi)康模貉芯咳~下珠提取物的體外抑菌作用和抑菌機(jī)制。方法：以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為對象菌，采用打孔法測定葉下珠水提取物、75％乙醇提取物、95％乙醇提取物及95％乙醇提取物各部分萃取物的抑菌圈直徑，采用稀釋法測定葉下珠水提取物、75％乙醇提取物、95％乙醇提取物的最低抑菌濃度。以大腸桿菌為指示菌，繪制葉下珠水提取物對大腸桿菌作用的生長曲線，應(yīng)用掃描電鏡方法觀察葉下珠水提取物對大腸桿菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果：葉下珠提取物對

4、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌均有一定的抑菌作用，其中對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度都是31.25 mg/mL，對大腸桿菌的最低抑菌濃度都是62.5 mg/mL。葉下珠水提取物能夠抑制大腸桿菌對數(shù)生長期的分裂。掃描電鏡觀察，菌體無飽滿感、變形、有的菌體破裂。結(jié)論：葉下珠提取物具有明顯的抑菌抗菌作用。 3.葉下珠提取物體外抗氧化作用目的：研究葉下珠提取物體外抗氧化作用。方法：應(yīng)用葉下珠水提取物、75％乙醇提取物、95％乙醇提取物體外對羥

5、自由基(OH)、氧陰離子(O2)的清除和抑制H2O2誘導(dǎo)小鼠紅細(xì)胞氧化溶血性等方法來研究葉下珠的抗氧化活性。 結(jié)果：當(dāng)濃度為1mg/mL時，葉下珠水提取物對羥自由基(OH)、超氧陰離子(O2)的清除和抑制H2O2誘導(dǎo)小鼠紅細(xì)胞氧化溶血性最強(qiáng)，為90.9％、62.5％、20.5％；75％乙醇提取物是35.6％、40.2％、16.7％；95％乙醇提取物是48.4％、21.3％、17.8％。結(jié)論：葉下珠提取物具有明顯的體外抗氧化作用。

6、 4．葉下珠提取物體外保肝作用目的：研究葉下珠提取物體外保肝作用。方法：采用體外培養(yǎng)法獲取羅非魚的原代肝細(xì)胞，用CCl4對肝細(xì)胞建立體外損傷模型，研究葉下珠水提取物、75％乙醇提取物、95％乙醇提取物對丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminitransperase，ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase，AST)活力的影響。結(jié)果：加藥組丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于損傷組，差異極