銀杏葉提取物對糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用.pdf

1、目的 觀察銀杏葉提取物對糖尿病大鼠血糖、內(nèi)生肌酐清除率的影響，以及其對糖尿病大鼠腎臟脂質(zhì)過氧化、一氧化氮水平、一氧化氮合酶活性及基因表達(dá)的影響，結(jié)合腎臟的形態(tài)學(xué)改變，探討銀杏葉提取物對實驗性糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)機(jī)制。 方法 雄性Sprague-Dauley大鼠35只，隨機(jī)取10只為正常對照組。余25只禁食12h后，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)50mg/Kg，復(fù)制糖尿病模型，模型成功20只。成模后20只大鼠隨機(jī)分成糖尿病

2、(DM)組(n=10)和銀杏葉提取物(GBE)治療組(n=10)。GBE治療組按8mg.kg-1.d-1劑量腹腔注射銀杏葉提取物注射液，正常對照組、DM組同時腹腔注射同容積的生理鹽水連續(xù)5周。處死前日，實驗大鼠置于代謝籠收集24h尿液，計量后混勻留尿8ml測定24h尿蛋白定量及尿肌酐。股動脈放血處死大鼠，收集血標(biāo)本，待測血糖、血肌酐(Scr)。同時迅速分離兩側(cè)腎臟，生理鹽水反復(fù)沖洗后稱重。取腎組織，以2.5％戊二醛、1％鋨酸雙固定，常規(guī)

3、丙酮脫水、Epon812包埋，超薄切片、染色，電鏡下觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)。制備腎組織勻漿，RT-PCR法測定誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表達(dá)水平。同時，以黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)含量，硝酸還原酶法測定一氧化氮(NO)含量、化學(xué)比色法測定一氧化氮合酶(NOS)活性。 結(jié)果 1.血糖、血肌酐、內(nèi)生肌酐清除率、

4、體重、腎肥大指數(shù)、尿蛋白DM組血糖、腎肥大指數(shù)、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)升高，體重下降，與正常對照組比較差異有顯著意義(P＜0.01)，Scr、尿蛋白升高，變化無顯著差異(P＞0.05)。GBE治療組血糖、腎肥大指數(shù)下降，與DM組比較差異有顯著意義(P＜0.05)；體重比DM組增加，但無顯著差異(P＞0.05)；血糖、腎肥大指數(shù)、體重與正常對照組比較差異顯著(P＜0.05)。 2.腎組織脂質(zhì)過氧化和NO水平DM組腎組織SOD活性

5、下降、NOS活性升高、MDA及NO含量升高，與正常對照組比較差異有顯著意義(P＜0.05)。GBE治療組，腎組織SOD活性升高、NOS活性下降、NO、MDA含量下降，與DM組比較差異均有顯著意義(P＜0.05)，與正常對照組比較無顯著差異(P＞0.05)。 3.腎組織NOSmRNA的表達(dá)DM組腎組織iNOSmRNA、eNOSmRNA的表達(dá)增強(qiáng)，nNOSmRNA的表達(dá)下降，與正常對照組比較差異有顯著意義(P＜0.01)。GBE治療

6、組eNOSmRNA表達(dá)下降，nNOSmRNA表達(dá)增強(qiáng)，與DM組比較有顯著差異(P＜0.01)，與正常對照組比較無顯著差異(P＞0.05)；而iNOSmRNA表達(dá)比DM組明顯下降(P＜0.01)，仍高于正常對照組(P＜0.05)。 4.腎臟超微結(jié)構(gòu)的變化透射電鏡下觀察，正常對照組大鼠腎小球毛細(xì)血管為有孔毛細(xì)血管，內(nèi)皮細(xì)胞見不規(guī)則窗孔，基底膜厚薄均勻，球囊臟層上皮細(xì)胞表面伸出許多細(xì)而長的足突，足突間保持一定間距，貼于基底膜外側(cè)；DM

7、組基底膜增厚，厚薄不均勻，部分區(qū)域呈局灶性增厚，足細(xì)胞突起腫脹、變短，并可見足突融合，球囊壁層細(xì)胞內(nèi)線粒體擴(kuò)張，腎小球內(nèi)膠原纖維增多；腎小管表面微絨毛腫脹，腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體擴(kuò)張，嵴減少。GBE治療組，基底膜基本正常，足細(xì)胞足突腫脹消退，內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)線粒體正常；腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹明顯減輕。 結(jié)論 1.GBE可提高DM大鼠腎臟SOD的活性，減少腎臟脂質(zhì)過氧化物MDA形成，從而減輕DM大鼠腎臟自由基代謝紊亂。