光學蛋白質(zhì)芯片檢測脂聯(lián)素的研究.pdf

1、目的： 橢偏光學蛋白質(zhì)芯片技術是將橢偏光生物顯微成像技術和集成化多元蛋白質(zhì)芯片技術相結(jié)合，發(fā)展形成的具有無標記、高通量、實時檢測等優(yōu)點的蛋白質(zhì)自動分析技術。本研究通過摸索芯片制備、探針裝配、生物學反應實驗條件和優(yōu)化實驗方法，制備了脂聯(lián)素檢測的光學蛋白質(zhì)芯片，通過檢測不同濃度脂聯(lián)素標準品，建立濃度-灰度標準曲線，進一步定量檢測血清脂聯(lián)素濃度，結(jié)果與酶聯(lián)免疫檢測方法進行對比，初步探索建立光學蛋白質(zhì)芯片定量檢測脂聯(lián)素的可行性。此外，血

2、清檢測脂聯(lián)素標本來自臨床患者，根據(jù)患者的病情分組，對其相關臨床意義也進行了探討。 方法： 采用橢偏光學生物顯微成像系統(tǒng)，微流控芯片加樣系統(tǒng)，光學蛋白質(zhì)芯片分析系統(tǒng)及軟件等。主要實驗材料：單晶硅片、表面改性劑、人脂聯(lián)素（Adiponectin）及其抗體（Anti-Adiponectin）、酪蛋白、人脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫試劑盒和59名糖尿病患者（依據(jù)24小時尿白蛋白排泄量將患者分為：大量蛋白尿組、微量蛋白尿組、正常蛋白尿組）血清等

3、。切割、清洗及羧基化表面改性硅片后制備脂聯(lián)素檢測芯片（6×8點芯片）：羧基化硅片表面活化、選擇最佳檢測探針濃度及裝配檢測探針（脂聯(lián)素抗體，濃度為200μg/ml）、酪蛋白封閉各檢測位點、檢測脂聯(lián)素標準品濃度梯度為（1、5、10、30、60μg/ml），根據(jù)各濃度的灰度成像值，建立濃度-灰度對應關系的標準曲線，求解對應關系公式，定量檢測患者血清脂聯(lián)素水平，結(jié)果與脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫試劑盒檢測結(jié)果對比分析。采用SPSS13．0軟件進行實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

4、分析，應用t檢驗等，P<0．05顯示差異具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 實驗結(jié)果顯示：根據(jù)脂聯(lián)素抗體最優(yōu)濃度選擇實驗，確定了檢測探針的最優(yōu)濃度為200μg/ml，可以較好滿足實驗檢測要求。脂聯(lián)素標準品檢測結(jié)果顯示：脂聯(lián)素標準品不同濃度（1、5、10、30、60μg/ml）與各對應檢測位點灰度值具有濃度灰度的對數(shù)對應關系，建立濃度－灰度對應關系的標準曲線，求解對應關系公式。檢測靈敏度達到1μg/ml，基本可以滿足臨床檢測的實用要

5、求。檢測糖尿病患者血清脂聯(lián)素濃度，并與酶聯(lián)免疫檢測結(jié)果進行比較，二者差異無統(tǒng)計學意義（p>0．05）。血清脂聯(lián)素檢測結(jié)果顯示，大量蛋白尿組患者血清脂聯(lián)素水平明顯高于正常蛋白尿組（p<0．05），微量蛋白尿組與正常蛋白尿組血清脂聯(lián)素水平無顯著性差異；血清脂聯(lián)素水平與血尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率呈正相關關系（p<0．05），血清脂聯(lián)素水平與總膽固醇、甘油三脂、收縮壓、舒張壓無明顯相關。 結(jié)論： 1、初步建立了橢偏光學蛋白