甘藍型油菜異三聚體G蛋白功能研究.pdf

1、異三聚體G蛋白介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是真核生物中最重要、最保守的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一。目前已知的異三聚體G蛋白的主要組分包括α亞基、β亞基、γ亞基和G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白(RGS)。α亞基在G蛋白被激活后與βγ二聚體分離，后又在RGS蛋白的作用下與βγ二聚體重新結(jié)合到一起;β亞基和γ亞基以βγ二聚體的形式發(fā)揮作用;RGS蛋白是G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的負(fù)調(diào)控因子，可以加速α亞基的失活從而終止G蛋白介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。
　　本文以甘藍型油菜揚油6

2、號及以其為親本獲得的轉(zhuǎn)基因株系為材料，研究了油菜G蛋白各組分的亞細(xì)胞定位以及相互作用、G蛋白在油菜ABA信號響應(yīng)中的作用以及對油菜品質(zhì)形成的影響和可能的作用機制。取得的主要結(jié)果如下:
　　(1)克隆了甘藍型油菜BnGA1、BnGB1、BnGG2和BnRGS1基因。BnGA1全長1152bp，編碼分子量為20kDa，等電點為5.83的多肽，包含有一個Gα功能域。BnGB1全長1137bp，編碼分子量為57kDa，等電點為6.66的多

3、肽，包含有7個β亞基標(biāo)志性的WD40功能域。BnGG2全長303bp，編碼分子量為17kDa，等電點為4.69的多肽，包含有一個Gγ功能域。BnRGS1全長1380bp，編碼分子量為52.6kDa，等電點為8.43的多肽，N端具有七次跨膜區(qū)域，C端具有RGS box。
　　(2)通過洋蔥表皮細(xì)胞和煙草葉片瞬時表達分析G蛋白各組分的亞細(xì)胞定位，結(jié)果表明:BnGA1定位于細(xì)胞膜，BnGB1在細(xì)胞膜上呈點狀分布，BnGG2定位在細(xì)胞膜和

4、細(xì)胞核，BnRGS1定位于細(xì)胞膜。
　　(3)通過酵母雙雜交分裂泛素系統(tǒng)研究G蛋白各組分之間的相互作用，結(jié)果表明BnGB1蛋白和BnGA1蛋白、BnGG2蛋白和BnGA1蛋白、BnGA1蛋白和BnRGS1蛋白、BnGG2蛋白和BnGB1蛋白、BnRGS1蛋白和BnGB1蛋白之間存在相互作用，BnGG2和BnRGS1之間沒有相互作用。
　　(4)優(yōu)化了油菜原生質(zhì)體提取和質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的方法，用不同濃度的ABA處理轉(zhuǎn)基因原生質(zhì)體，結(jié)果