Fibrillin轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜中的研究.pdf

1、Fibrillin是一類由核基因編碼，與質(zhì)體相關(guān)的脂連接蛋白，廣泛存在于單子葉和雙子葉植物中。在逆境條件下，如強(qiáng)光、寒冷和干旱環(huán)境，該類蛋白大量積累，說明Fibrillin在生物脅迫下發(fā)揮重要功能。在擬南芥中已發(fā)現(xiàn)Fibrillin是ABl2(ABA insensitive)相互作用蛋白質(zhì)，其合成也依賴于ABll，而ABll和ABl2是脫落酸(ABA)信號(hào)傳導(dǎo)過程中的關(guān)鍵因子，推測Fibrillin作為負(fù)調(diào)控因子，參與到ABA信號(hào)傳導(dǎo)途

2、徑。同時(shí)Fibrillin與油質(zhì)體相關(guān)，強(qiáng)光下對光合系統(tǒng)Ⅱ有保護(hù)作用，則該基因在油菜中的過量表達(dá)可能有利于提高油菜的抗逆能力和產(chǎn)油量。因此研究Fibrillin在油菜中的表達(dá)具有重要的理論意義和實(shí)踐意義。 在本實(shí)驗(yàn)中，將擬南芥Fibrillin操縱子連接到帶有熒光素酶(LUC)報(bào)告基因的pBI22l質(zhì)粒上，通過聚乙二醇(PEG)導(dǎo)入甘藍(lán)型油菜蜀雜9號(hào)原生質(zhì)體中進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)，檢測報(bào)告基因熒光素酶的表達(dá)量，初步得到油菜原生質(zhì)體表達(dá)系

3、統(tǒng)。加入一定量的脫落酸(ABA)后，發(fā)現(xiàn)報(bào)告基因的表達(dá)量有上升趨勢，說明ABA能誘導(dǎo)報(bào)告基因的表達(dá)，擬南芥Fibrillin操縱子在甘藍(lán)型油菜原生質(zhì)體中對ABA的誘導(dǎo)敏感。 為了進(jìn)一步驗(yàn)證Fibrillin與ABA之間的關(guān)系，把Fibrillin操縱子和Fibrillin cDNA分別連接到帶有葡萄糖昔酶(GUS)報(bào)告基因的pBIl21質(zhì)粒上，經(jīng)農(nóng)桿菌浸染甘藍(lán)型油菜84100-18的下胚軸，以期獲得穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株。我們根據(jù)

4、材料特點(diǎn)，優(yōu)化了預(yù)培養(yǎng)、農(nóng)桿菌浸染、共培養(yǎng)、誘導(dǎo)愈傷、誘導(dǎo)芽、生根等組織培養(yǎng)的各個(gè)步驟，最終經(jīng)卡那霉素篩選獲得了油菜抗性苗。通過PCR驗(yàn)證，初步證明得到了含外源Fibrillin cDNA的轉(zhuǎn)基因植株，沒有得到含F(xiàn)ibrillin操縱子的轉(zhuǎn)基因植株。對于含外源Fibrillin cDNA的轉(zhuǎn)基因植株，我們將對其進(jìn)行功能鑒定，如通過基因在植株中的過量表達(dá)，檢測其在光合作用中所起的作用。針對Fibrillin啟動(dòng)子，我們將繼續(xù)優(yōu)化條件，以期