小檗胺對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　探討小檗胺對(duì)大鼠骨肉瘤UMR-106細(xì)胞增殖的抑制作用及機(jī)制，為其臨床治療骨肉瘤的應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.UMR-106細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清、青霉素100 U/mL及鏈霉素100 mg/L的RPMI-1640培養(yǎng)液中，37℃、5％CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)。
　　2.用不同濃度的小檗胺(0、2、4、8、16、32 mg/L)分別處理UMR-106細(xì)胞，作用時(shí)間分別為24，48

2、，72 h，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)小檗胺對(duì)UMR-106細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　3.用不同濃度的小檗胺(0、4、8、16 mg/L)分別處理UMR-106細(xì)胞24h，Hoechst33258染色激光共聚焦掃描顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。
　　4.用不同濃度的小檗胺(0、4、8、16 mg/L)分別處理UMR-106細(xì)胞24h后，采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率（AnnexinⅤ/PI染色）
　　

3、5.用不同濃度的小檗胺(0、4、8、16 mg/L)分別處理UMR-106細(xì)胞24h后，采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期變化（PI染色）
　　6.用不同濃度的小檗胺(0、4、8、16 mg/L)分別處理UMR-106細(xì)胞24h后，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、Bax水平，
　　7.用不同濃度的小檗胺(0、4、8、16 mg/L)分別處理UMR-106細(xì)胞24h后，采用分光光度法檢測(cè)Caspase

4、-3的活性。
　　8.采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(x)±s表示。多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)認(rèn)為有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1.小檗胺以劑量依賴方式顯著抑制UMR-106細(xì)胞的增殖(P＜0.01)，其作用24、48、72 h的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為24.69、8.03和3.54 mg/L。
　　2.小檗胺處理組可見核固縮和

5、凋亡小體。
　　3.小檗胺處理組細(xì)胞(0、4、8、16 mg/L)早期凋亡率分別為(1.64±0.29)％、(3.58±0.31)％、(6.27±0.47)％和(11.27±1.09)％，與0 mg/L小檗胺組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）
　　4.與0 mg/L小檗胺組比較，G0/G1期細(xì)胞比例增高，而S期和G2/M期細(xì)胞比例降低(P＜0.01)。
　　5.小檗胺劑量依賴性地降低Bcl-2，增高Bax，降低B