棉花細(xì)胞質(zhì)雄性不育恢復(fù)基因候選區(qū)域基因SSCP標(biāo)記開發(fā)與分析.pdf

1、棉花三系雜交制種技術(shù)不僅成本低廉、簡便高效，而且能夠顯著提高棉花產(chǎn)量。棉花恢復(fù)基因定位與分析對于研究恢復(fù)基因作用機(jī)制和改良恢復(fù)系具有重要意義。本研究以哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育系和恢復(fù)系為親本，構(gòu)建F2群體，通過調(diào)查F2群體單株的花粉育性，確認(rèn)恢復(fù)基因的遺傳模式;對課題前期初步定位的13個SSR標(biāo)記進(jìn)行D基因組本地Blast分析，然后對候選區(qū)域內(nèi)存在的PPR基因及其它基因在NCBI網(wǎng)站Blast分析推測其同源基因;采用SSCP標(biāo)記技術(shù)結(jié)合

2、群體分離分析法(BSA)，篩選與恢復(fù)基因連鎖的分子標(biāo)記，并對其進(jìn)行群體基因型分析，構(gòu)建遺傳連鎖圖譜;同時，對目標(biāo)區(qū)域內(nèi)17個候選基因在三系花蕾發(fā)育四個時期的表達(dá)模式進(jìn)行熒光定量PCR分析，明確這些基因在三系材料中的表達(dá)模式。取得的主要實驗結(jié)果如下:
　　1、通過對初步定位的13個SSR標(biāo)記經(jīng)過D基因組本地Blast分析，發(fā)現(xiàn)13個標(biāo)記分布在9個不同的Scaffolds上，在包含最近的標(biāo)記BNL3535的160kb范圍內(nèi)，發(fā)現(xiàn)有9個

3、PPR基因和9個非PPR間隔基因成簇存在，其中標(biāo)記BNL3535位于2個PPR基因Cotton_D_gene_10013437和Cotton_D_gene_10013446之間，對應(yīng)的物理距離分別為40.89kb和53.66kb。
　　2、分段設(shè)計出覆蓋這18個基因序列的引物共155對，再利用SSCP技術(shù)結(jié)合群體分離分析法(BSA)篩選到15對SSCP多態(tài)性引物，然后結(jié)合前期的3個緊密連鎖的SSR標(biāo)記，對這18個標(biāo)記在F2群體中進(jìn)

4、行基因型分析，結(jié)果表明這些標(biāo)記定位在距離恢復(fù)基因4.8cM范圍內(nèi)。其中BNL3535是距離最近的標(biāo)記，遺傳距離為2.9 cM，343401-1和344805-2是距離恢復(fù)基因最近的SSCP標(biāo)記，遺傳距離均為3.2 cM。
　　3、對目標(biāo)區(qū)域內(nèi)的17個基因在三系花蕾發(fā)育四個時期的表達(dá)模式進(jìn)行分析，結(jié)果表明，這9個PPR基因的在三系花蕾發(fā)育前期(1-2 mm)表達(dá)差異不明顯，在進(jìn)入3mm以后時期的表達(dá)模式產(chǎn)生明顯差異;而大部分非PPR