中國境內(nèi)部分區(qū)域葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)的遺傳分化.pdf

1、葡萄霜霉?。℅rape Downy Mildew, GDM）由葡萄霜霉菌（Plasmopara viticola）引起，是世界范圍內(nèi)威脅葡萄生產(chǎn)的一種重要病害，常給葡萄產(chǎn)業(yè)帶來重大經(jīng)濟損失。為研究葡萄霜霉菌對中國不同地區(qū)葡萄霜霉菌群體的遺傳分化，本研究利用單斑分離法獲取較純菌株，通過多基因型分析方法對葡萄霜霉病菌進行遺傳分化多態(tài)性分析，為葡萄霜霉病的防治提供分子水平的理論依據(jù);同時也可以豐富葡萄霜霉菌遺傳分化的數(shù)據(jù)庫。
　　本研究

2、以來自中國9個省、市的103份葡萄霜霉菌樣品為材料，利用多基因型分析方法進行遺傳分化和親緣關系研究，主要研究結果如下:
　　1.由于菌株的易污染因而獲得葡萄霜霉病菌的單孢純培養(yǎng)困難，本研究開發(fā)了一種簡便、快速、易操作且成功率高的葡萄霜霉病菌單孢子囊分離培養(yǎng)方法，成功構建了葡萄霜霉病菌菌株純化與快速擴繁體系。
　　2.本研究對常規(guī)DNA提取方法—十六烷基三甲基溴化銨法進行了改良，用75％無水乙醇對收集的葡萄霜霉病菌樣品進行雜質(zhì)

3、消除處理，保證葡萄霜霉病菌基因組DNA的質(zhì)量和純度，使其能滿足多基因型技術的分析要求。
　　3.通過對P.viticola基因序列的多態(tài)性分析，計算種群的單倍型多樣性Hd、核苷酸多樣性指數(shù)π、核苷酸平均差異數(shù)k、及Tajima's D值中性檢測的結果顯示我國不同地區(qū)葡萄霜霉病菌種群間物種的進化存在多樣性，核苷酸多樣度較高，β-微管蛋白(TUB)基因和肌動蛋白基因的片段(ACT)中性檢測P＜0.001差異極顯著，表明基因的滲透和在群

4、體遺傳分化中的影響較大。
　　3.以葡萄霜霉病菌的標準菌株序列作為參考，以大豆疫霉Phytophthora-sojae為外圍菌株進行多位點整合分析。運用遺傳進化分析軟件PAUP(V4.0)，通過TBR(treebisection-reconnection)交換算法的啟發(fā)式搜索(heuristic search)得到，multitrees參數(shù)選用（默認），同時進行1000次Bootstrap自舉法檢驗，并將Bootstrap產(chǎn)生的自