葡萄葉提取物與婁地青霉防治葡萄霜霉病的研究.pdf

1、葡萄霜霉病是世界上最嚴(yán)重的卵菌病害之一，每年都需使用大量化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行防治。為了避免化學(xué)農(nóng)藥帶來的環(huán)境和健康等諸多方面的問題，篩選出可應(yīng)用田間的生物防治資源，本研究以葡萄葉提取物與婁地青霉為研究對象，探究不同葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉游動(dòng)孢子釋放、萌發(fā)和游動(dòng)性的影響;采用顯微觀察和葉片點(diǎn)接法測定巨峰葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉孢子囊和游動(dòng)孢子的抑制作用以及對葡萄霜霉病的防治效果，并應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對葡萄葉提取物組成成分進(jìn)行分析;試驗(yàn)從七種藍(lán)

2、紋奶酪中共分離到四株青霉，測定四株青霉的孢子懸浮液和無菌發(fā)酵液對葡萄生單軸霉的抑制作用和對葡萄霜霉病的室內(nèi)外的防治效果，并對有效菌株進(jìn)行鑒定。本研究主要結(jié)果如下:
　　不同品種的葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉游動(dòng)孢子均有顯著的抑制作用且新老葉之間差異較小。抗病品種巨峰葉片提取物在濃度為5 mg/mL時(shí)對游動(dòng)孢子釋放和萌發(fā)的抑制率都能達(dá)90％，并能使游動(dòng)孢子失去游動(dòng)性;感病品種紅乳葉片提取物在濃度為10 mg/mL以上時(shí)才能達(dá)到上述效果

3、;感病品種美人指葉片提取物在濃度為5mg/mL時(shí)對游動(dòng)孢子萌發(fā)的抑制率可達(dá)90％，在濃度為10 mg/mL時(shí)才對游動(dòng)孢子的釋放和游動(dòng)性具有強(qiáng)烈的抑制作用。
　　葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉孢子囊和游動(dòng)孢子的萌發(fā)均有明顯的抑制作用，當(dāng)使用濃度為10 mg/mL時(shí)，葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉孢子囊和游動(dòng)孢子的萌發(fā)抑制率都在85％以上。熒光顯微觀察發(fā)現(xiàn)，葡萄葉提取物可以抑制葡萄生單軸霉在葉片內(nèi)的擴(kuò)展，在10 mg/mL濃度下，葡萄葉提取物

4、能顯著抑制孢子囊的形成，其抑制率為82.4％。室內(nèi)防治試驗(yàn)顯示，防治效果隨施用濃度的提高而增加，在50 mg/mL濃度下，葡萄葉提取物的防治效果可達(dá)100％。在田間防治試驗(yàn)中，葡萄葉提取物對葡萄霜霉病具有良好的預(yù)防效果與化學(xué)藥劑不存在顯著差異，發(fā)病后的防治效果達(dá)63.2％。經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測，葡萄葉提取物成分復(fù)雜，共含有33種物質(zhì)，且主要為芪類化合物，如白藜蘆醇、紫檀芪、蛇葡萄素和葡萄素，其中白藜蘆醇和紫檀芪均表現(xiàn)出對葡萄生單軸霉強(qiáng)烈的

5、抑制效果，紫檀芪的抑制作用強(qiáng)于白藜蘆醇。
　　菌株P(guān)3的孢子懸浮液對葡萄生單軸霉孢子囊萌發(fā)的抑制作用顯著好于其余菌株，萌發(fā)率僅為18％，同時(shí)其室內(nèi)防效達(dá)92％。經(jīng)搖床培養(yǎng)法，四株青霉的無菌發(fā)酵液與對照相比均可顯著抑制孢子囊的萌發(fā)，且不存在顯著差異。采用靜置培養(yǎng)法，菌株P(guān)2和P3的無菌發(fā)酵液對孢子囊的抑制作用最好，且與搖床培養(yǎng)不存在顯著差異;菌株P(guān)1和P4的無菌發(fā)酵液對孢子囊的抑制作用較差。室內(nèi)防治試驗(yàn)表明:四株青霉的無菌發(fā)酵液只有

6、菌株P(guān)3的發(fā)酵液可完全阻止葡萄霜霉病的發(fā)生，其余菌株發(fā)酵液均有霜霉病發(fā)生，且發(fā)病率均在85％以上與對照不存在顯著差異。田間試驗(yàn)表明，菌株P(guān)3的孢子懸浮液和無菌發(fā)酵液均可預(yù)防葡萄霜霉病的發(fā)生并對病害的防治效果達(dá)85％以上，與化學(xué)藥劑不存在顯著差異。經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子鑒定菌株P(guān)3為婁地青霉(Penicillium roqueforti)。其無菌發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯提取后，經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用分析，初步鑒定其抑菌活性成分含有mycophenolic acid和