巨型艾美耳球蟲保定株的分離鑒定及免疫原性研究.pdf

1、巨型艾美耳球蟲(Eimeria maxima)是集約化養(yǎng)雞場最常見的3種球蟲之一，主要感染3月齡以內(nèi)的雛雞，分布較廣，致病力中等。小劑量感染時(shí)不會(huì)引起嚴(yán)重死亡，但造成飼料轉(zhuǎn)化率低，降低雛雞體增重，引起巨大的經(jīng)濟(jì)損失。鑒于該球蟲對(duì)養(yǎng)雞業(yè)的重要危害，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了大量研究。本試驗(yàn)通過分離獲得該球蟲純種卵囊建立純種傳代系，對(duì)其進(jìn)行一般生物學(xué)特性、致病性、免疫原性以及分子生物學(xué)等方面的研究，為巨型艾美耳球蟲的深入研究奠定基礎(chǔ)。
　　

2、本研究采用單卵囊分離技術(shù)，從保定市某雞場球蟲混合感染的雛雞糞便中，分離出疑似巨型艾美耳球蟲。分離的球蟲進(jìn)行形態(tài)學(xué)和生活史觀察，其寄生于小腸中段、卵囊為卵圓形、卵較大、卵囊壁金黃色。測100個(gè)卵囊的大小為(32.0-40.8)×(20.8-31.2)um，平均大小為36.4um×26.0um，卵囊形態(tài)指數(shù)為1.4。卵囊窄端有一折光性強(qiáng)的極體，無內(nèi)外殘?bào)w。最短孢子化時(shí)間為26h，完全孢子化時(shí)間為28h，潛隱期128h。鑒定為巨型艾美耳球蟲，

3、命名為巨型艾美耳球蟲保定株。
　　分別用1×104、2×104、5×104、10×104個(gè)/只孢子化卵囊的劑量感染四組海蘭灰公雛，對(duì)其致病性進(jìn)行研究，第一組為健康對(duì)照組。以臨床癥狀、體重、死亡率、觀察糞便計(jì)分、卵囊排出量為判定指標(biāo)，對(duì)保定株E.maxima的致病性進(jìn)行研究。感染雞出現(xiàn)驚群、采食量下降、腸粘膜出血、排血便等臨床癥狀。感染雞的卵囊排出總量分別為:3.24×106個(gè)/g、3.97×106個(gè)/g、7.10×106個(gè)/g、1

4、7.04×106個(gè)/g;相對(duì)增重率分別為:81.41％、62.32％、45.27％、28.42％;糞便觀察記分別為:1分、1分、2分、3分;死亡率分別為:0％、6.67％、13.33％、23.33％。
　　對(duì)巨型艾美耳球蟲保定株進(jìn)行分子學(xué)鑒定，經(jīng)純化、提取基因組DNA后，用已報(bào)道的種特異引物做PCR擴(kuò)增，在151bp處擴(kuò)增出了清晰的目的條帶，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行膠回收、測序。與Genbank中的11株巨型艾美耳球蟲相關(guān)序列進(jìn)行同源性比對(duì)

5、。從而確定本試驗(yàn)分離蟲株為巨型艾美耳球蟲。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)保定株與JN113578.1(YZ株)存在較近的親緣關(guān)系，表明巨型艾美耳球蟲的親緣關(guān)系與地理分布沒有直接關(guān)系。
　　本試驗(yàn)用巨型艾美耳球蟲保定株和黃芪多糖注射液免疫增效劑免疫雛雞，將7日齡雛雞隨機(jī)分為5組，即健康對(duì)照組、黃芪多糖注射液免疫增效組、人工感染免疫組、黃芪多糖注射液+巨型艾美耳球蟲保定株人工感染免疫組和攻蟲不免疫組每組30只。7日齡免疫一次，人工感染免疫組用1×

6、103個(gè)卵囊，黃芪多糖注射液免疫增效組0.1ml/只，黃芪多糖注射液+巨型艾美耳球蟲保定株人工感染免疫組為(0.1ml+1×103個(gè))/只。14日齡加強(qiáng)免疫一次，人工感染免疫組用3×103個(gè)卵囊，黃芪多糖注射液免疫增效組0.1ml/只，黃芪多糖注射液+巨型艾美耳球蟲保定株人工感染免疫組為（0.1m1+3×103個(gè)）/只。雛雞21日齡用5.0×104個(gè)巨型艾美耳球蟲保定株球蟲孢子化卵囊進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，檢測雛雞血液T淋巴細(xì)胞增殖能力，測定血清