雷公藤內(nèi)酯醇誘導人非小細胞肺癌A549細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：探討雷公藤內(nèi)酯醇（Triptolide，TPL）對人非小細胞肺癌A549細胞增殖的抑制作用及促A549細胞凋亡的分子機制，為雷公藤內(nèi)酯醇治療非小細胞肺癌提供一定的實驗依據(jù)。
　　 方法：1、以A549細胞為細胞模型，采用MTT法測定不同濃度不同時間TPL對A549細胞的增殖抑制作用。2、采用瓊脂糖凝膠電泳法（DNA ladder法）、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)熒光染色法檢測A549凋亡。3、采用Caspase-3活性檢測

2、法分析TPL促A549細胞凋亡機制。4、采用逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）法檢測A549細胞Survivin mRNA的水平，分析其凋亡調(diào)控途徑。
　　 結(jié)果：1、在濃度6.25-100ng/ml、時間12-48h檢測范圍內(nèi)，TPL對A549細胞增殖抑制作用同對照組相比具有顯著差異（p<0.05）。2、DNA ladder法檢測到DNA梯狀條帶，證明A549細胞凋亡的發(fā)生；AO/EB熒光染色法檢測到凋亡細胞特異性形態(tài)學改

3、變，且48h內(nèi)凋亡率隨著時間延長而增加（p<0.05）。3、TPL激活Caspase-3，48h內(nèi)Caspase-3活性較對照組有顯著提高（p<0.05），12h處活性最大；TPL濃度6.25-100ng/ml內(nèi)，Caspase-3活性升高，并具有濃度依賴性（p<0.05）。4、TPL顯著抑制A549細胞Survivin mRNA水平（p<0.05）。5、Survivin mRNA水平與Caspase-3活性呈負相關(guān)。
　　 結(jié)