UrotensinⅡ?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分:UrotensinⅡ及其受體GPR14在非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中的表達(dá)
　　 目的：研究UrotensinⅡ(UⅡ)及其受體GPR14在非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　 方法：
　　 1.肺癌A549細(xì)胞的培養(yǎng):體外常規(guī)培養(yǎng)。
　　 2.RT-PCR法檢測UⅡ及其受體GPR14 mRNA在肺癌A549細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 3.免疫細(xì)胞化學(xué)技

2、術(shù)檢測UⅡ肽及其受體GPR14分子在肺癌A549細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 4.Western blot法檢測UⅡ肽及其受體GPR14分子在肺癌A549細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 5.ELISA檢測UⅡ肽在肺癌A549細(xì)胞裂解液及培養(yǎng)基上清液中的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.體外培養(yǎng)的肺癌A549細(xì)胞生長良好,可以用于以下實(shí)驗(yàn)。
　　 2.凝膠電泳顯示,在肺癌A549細(xì)胞中,UⅡ及其受體GPR14 mRNA

3、有表達(dá)。
　　 3.免疫細(xì)胞化學(xué)顯示,在肺癌A549細(xì)胞中,UⅡ肽主要表達(dá)在細(xì)胞漿中,UⅡ受體GPR14分子主要表達(dá)在細(xì)胞膜上。
　　 4.Western blot顯示,在肺癌A549細(xì)胞中,UⅡ肽及其受體GPR14分子均有表達(dá)。
　　 5.ELISA檢測顯示,UⅡ肽在肺癌A549細(xì)胞裂解液中的含量約為125.58ng(約5.6×106個(gè)細(xì)胞),培養(yǎng)基上清液中未檢出UⅡ。
　　 結(jié)論：
　　 在本

4、實(shí)驗(yàn)條件下得出以下結(jié)論:
　　 無論從基因水平還是蛋白質(zhì)水平,UⅡ及其受體在非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中均有
　　 表達(dá)。
　　 第二部分:UrotensinⅡ?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響
　　 目的：研究UⅡ?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　 方法：
　　 1.肺癌A549細(xì)胞分別用10-9、10-8、10-7、10-6M的UⅡ進(jìn)行處理,以生理鹽水處理作為對照

5、,通過MTT方法檢測肺癌A549細(xì)胞的增殖活性。
　　 2.肺癌A549細(xì)胞分為對照組、UⅡ組、順鉑組、順鉑+UⅡ組,體外常規(guī)培養(yǎng),TUNEL法檢測UⅡ?qū)Ψ伟〢549細(xì)胞凋亡的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞處理48小時(shí)后,與對照組相比,10-9、10-8、10-7、10-6M UⅡ組細(xì)胞增殖能力顯著提高(P＜0.01),10-7M UⅡ?qū)Ψ伟〢549細(xì)胞的增殖能力最強(qiáng)。
　　 2.各實(shí)驗(yàn)組細(xì)

6、胞處理48小時(shí)后,與對照組比較,UⅡ組肺癌A549細(xì)胞的凋亡率顯著降低(P＜0.01);與對照組比較,順鉑組肺癌A549細(xì)胞的凋亡率顯著增加(P＜0.01);與順鉑組相比,順鉑+UⅡ組肺癌A549細(xì)胞的凋亡率顯著降低(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 在本實(shí)驗(yàn)條件下得出以下結(jié)論:體外實(shí)驗(yàn)表明,UⅡ能明顯促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的增殖,抑制肺癌A549細(xì)胞的凋亡,UⅡ能夠降低順鉑促進(jìn)肺癌A549細(xì)胞凋亡的能力。

7、r>　　 第三部分:UrotensinⅡ?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌A549細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤后腫瘤生長的影響
　　 目的：觀察UⅡ?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌A549細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤后腫瘤生長的影響。
　　 方法：
　　 1.將非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞接種于裸鼠皮下建立移植瘤模型,待移植瘤平均直徑達(dá)到4mm后隨機(jī)分為四組:對照組、UⅡ組(401μg/kg)、順鉑組(25mg/kg)、順鉑+UⅡ組(順鉑,25mg/kg和UⅡ,40μg/

8、kg),每周給予相應(yīng)的藥物兩次。每周測量移植瘤體積,連續(xù)給藥7周。
　　 2.繪制各組裸鼠移植瘤生長曲線。
　　 3.稱量各組裸鼠移植瘤的重量。
　　 結(jié)果：
　　 1.所有接種肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的裸鼠均成瘤。
　　 2.與對照組相比,UⅡ組裸鼠移植瘤生長曲線更加陡直;與對照組相比,順鉑組裸鼠移植瘤生長曲線平緩;與順鉑組相比,順鉑+UⅡ組裸鼠移植瘤生長曲線較陡直。
　　 3.與對照組相比,