黑林1號(hào)楊轉(zhuǎn)幾丁質(zhì)酶基因的研究.pdf

1、黑林1號(hào)(Populus simonii×Populus nigra)×Populus15 ACL是以小黑楊為母本，波蘭15A為父本，人工雜交選育的優(yōu)良無性系，其根系發(fā)達(dá)，生長(zhǎng)迅速，抗旱、耐寒。7年生材積生長(zhǎng)量平均比小黑楊大42％。該品系可用于營(yíng)造農(nóng)田、防護(hù)林、用材林。
　　本論文以MS+0.3mg/L6-BA+0.07mg/L NAA為分化培養(yǎng)基、WPM+0.4mg/L IBA為生根培養(yǎng)基，以外源幾丁質(zhì)酶基因?yàn)槟康幕颍诖嘶A(chǔ)

2、上進(jìn)行黑林1號(hào)的組培體系建立及遺傳轉(zhuǎn)化研究，通過葉片及組培苗莖段的敏感性試驗(yàn)，最終確定葉片分化時(shí)卡那霉素的臨界濃度為20mgL，芽誘導(dǎo)生根時(shí)卡那霉素的臨界濃度為10mg/L，抑菌抗生素頭孢塞肟鈉500mg/L的濃度不會(huì)對(duì)黑林1號(hào)葉片分化及生根培養(yǎng)產(chǎn)生不利影響。成功摸索出農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黑林楊遺傳轉(zhuǎn)化體系:選取生長(zhǎng)20d左右的幼嫩黑林楊組培苗葉片，通過主葉脈剪2～3下，預(yù)培養(yǎng)2～3d;將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的農(nóng)桿菌(OD600=0.5～0.7)離

3、心后用液體MS培養(yǎng)基或無菌蒸餾水稀釋成OD600=0.3～0.4濃度進(jìn)行浸染;侵染時(shí)間為6～10min;共培養(yǎng)2～3d后，轉(zhuǎn)入到篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生（含有20mg/L卡那霉素和500mg/L的頭孢塞肟鈉），以及生根階段的卡那霉素連續(xù)篩選（含有10mg/L卡那霉素和500mg/L的頭孢塞肟鈉）。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將外源幾丁質(zhì)酶基因?qū)氲胶诹?號(hào)楊基因組中，為黑林1號(hào)的遺傳轉(zhuǎn)化及抗性育種提供了理論基礎(chǔ)。
　　PCR分子檢測(cè)經(jīng)