ILK在2型糖尿病大鼠腎臟的表達(dá)及辛伐他汀的干預(yù)作用.pdf

1、目的：隨著生活水平的提高，糖尿病（diabetes mellitus，DM）的患病率呈逐年上升趨勢，糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥，是1型糖尿病病人死亡的主要原因，在包括美國、澳大利亞、歐洲的一些地區(qū)以及新加坡等在內(nèi)的許多國家中，DN是引起終末期腎?。╡nd stage renal disease，ESRD）的第一位原因。整合素連接激酶（integrin－linked kina

2、se，ILK）在腎臟中高表達(dá)，可能在糖尿病腎損害中發(fā)揮作用。他汀類藥物不僅有調(diào)脂的腎臟保護(hù)作用，而且還有抗炎癥、免疫調(diào)節(jié)等非依賴調(diào)脂的腎臟保護(hù)作用。本研究通過高糖高脂膳食飼養(yǎng)Sprague-Dawlay（SD）大鼠，再注射小劑量鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ），誘發(fā)胰島素抵抗和高血糖，從而復(fù)制2型糖尿?。═ype2 diabetes mellitus，T2DM）大鼠模型，觀察糖尿病大鼠腎臟ILK表達(dá)水平、形態(tài)學(xué)改變及辛

3、伐他汀治療的影響，探討ILK在2型糖尿病腎臟病變中的作用和辛伐他汀腎臟保護(hù)作用及機(jī)制。
　　 方法：從50只SD大鼠中隨機(jī)抽取10只作為正常對照組（A組），其余作為實(shí)驗(yàn)組。對照組喂以普通飼料，實(shí)驗(yàn)組喂以高糖高脂飼料（普通飼料中加入20％蔗糖、2.5％膽固醇、15％熟豬油）。4周后實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)胰島素抵抗（insulin resistance，IR），再給予STZ30 mg/kg腹腔注射。于實(shí)驗(yàn)第6周末選取空腹血糖（fasting

4、 blood glucose，F(xiàn)BG）>7.8 mmol/L且伴有胰島素敏感性降低者作為T2DM大鼠模型，并隨機(jī)分為2組，即T2DM模型組（B組）、T2DM辛伐他汀治療組（C組）。實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間共14周。于第14周末心臟取血測定FBG、空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)INS）、胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitivity index，ISI）、血肌酐（serum creatinine，Scr）與三酰甘油（trigl

5、yceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low densitv lipoprotein cholesterol，LDL-C）以及極低密度脂蛋白膽固醇（very low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平。第14周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，代

6、謝籠收集24小時(shí)尿液，測定尿白蛋白與尿肌酐（urine creatinine，Ucr），并計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率（creatinine clearance rate，Ccr）。取大鼠腎皮質(zhì)行光鏡（HE染色、PAS染色、Masson染色）及電鏡觀察。免疫組化檢測ILK在腎皮質(zhì)中的表達(dá)，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算腎皮質(zhì)中ILK的積分光密度（integral optical density，IOD）值，應(yīng)用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算腎臟纖維化百分率。使

7、用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，兩組比較采用t/t’檢驗(yàn)，組間比較采用方差分析，相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、實(shí)驗(yàn)第6周末各項(xiàng)檢測指標(biāo)：注射STZ2周后，實(shí)驗(yàn)組大鼠FBG（12.87±1.00）mmol/L高于正常對照組5.06±0.70mmol/L，F(xiàn)INS18.79（18.23，19.29）mlU/L與對照組18.35（17.95，18.98）mIU/L比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），

8、ISI0.0048（0.0045，0.0053）低于正常對照組0.0106（0.0103，0.0112）（均P<0.01），至此T2DM模型復(fù)制成功。
　　 2、實(shí)驗(yàn)14周末生化指標(biāo)：A組大鼠FBG（4.96±0.92）mmol/L、TG（0.67±0.21）mmol/L、TC（2.23±0.43）mmol/L、LDL-C（1.23±0.12）mmol/L、VLDL-C（0.36±0.08）mmol/L、HDL-C（0.89±0

9、.06）mmol/L，B組大鼠FBG（13.154±1.18）mmol/L、TG（1.89±0.20）mmol/L、TC（3.23±0.28）mmol/L、LDL-C（2.32±0.12）mmol/L、VLDL-C（0.85±0.11）mmol/L均高于A組（p<0.01），HDL-C（0.37±0.08）mmol/L低于A組（p<0.01），C組大鼠FBG（12.70±1.05）mmol/L與B組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），TG（1

10、.33±0.26）mmol/L、TC（2.44±0.35）mmol/L、LDL-C（1.55±0.11）mmol/L、VLDL-C（0.57±0.10）mmol/L均低于B組（p<0.01），HDL-C（0.56±0.10）mmol/L高于B組（p<0.01）。
　　 3、腎重指數(shù)：與A組（3.594±0.29）比較，B組腎重指數(shù)（8.96±1.08）明顯增加（P<0.01），提示腎臟肥大；與B組比較，C組腎重指數(shù)（7.01±0

11、.97）減?。≒<0.01），但仍高于A組（P<0.01）。
　　 4、尿白蛋白：與A組（0.03+0.21mg/24h）比較，B組尿白蛋白（1.37±0.05mg/24h）明顯增加（p<0.01）；與B組比較，C組尿白蛋白（0.66±0.02mg/24h）明顯減少，但仍高于A組（p<0.01）。
　　 5、腎功能：①BUN：B組（8.22±1.36）mmol/L和C組（7.75±1.52）mmol/L與A組（6.99±

12、1.45）mmol/L比較，BUN水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。②Scr：B組（62.59±10.45）μmol/L和C組（60.88±10.10）μmol/L與A組（60.50±6.02）μmol/L比較，Scr水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。③Ccr：B組Ccr（1.32±0.36 ml/min）明顯高于A組（0.12±0.06 ml/min）（p<0.01）；C組Ccr（0.47±0.35ml/min）低于B組，但仍

13、高于A組（p<0.01）。
　　 6、組織形態(tài)學(xué)改變：光鏡顯示，HE染色：A組腎小球形態(tài)規(guī)則，腎小球內(nèi)細(xì)胞排列規(guī)則，腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)基底膜清晰規(guī)整，包曼氏囊腔清晰可見；B組腎小球體積明顯增大；C組腎小球體積有所減小，但與A組仍有差別。PAS染色：A組腎小球形態(tài)規(guī)則，有少量PAS陽性物質(zhì)；B組PAS陽性物質(zhì)增多，腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)基底膜普遍增厚，個(gè)別視野可見腎小球滲出性病變，表現(xiàn)為囊滴；C組病變略有減輕，表現(xiàn)為腎小球輕度增大，腎小球

14、內(nèi)細(xì)胞數(shù)目無明顯增多，腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)基底膜輕微增厚。Masson染色：A組大鼠腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)基底膜清晰規(guī)整，腎小球系膜區(qū)基質(zhì)呈藍(lán)色；B組腎小球肥大，基底膜明顯增厚，系膜區(qū)基質(zhì)明顯增多，膠原纖維增加；C組病變明顯減輕，系膜區(qū)基質(zhì)較少，基底膜輕微增厚，膠原纖維較少。電鏡顯示，A組大鼠腎小球細(xì)胞基底膜均勻一致，足突排列整齊，內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)正常；B組腎小球基底膜彌漫性增厚，呈丘狀隆起，相鄰足突大部分融合，內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)增多；C組腎小球基底膜彌漫

15、性增厚程度及系膜基質(zhì)增多程度有所減輕，足突尚存，但與A組仍有差別。
　　 7、ILK蛋白表達(dá)水平：免疫組化圖像分析顯示，B組大鼠腎皮質(zhì)ILK表達(dá)的IOD值（50.95±4.64）是A組（6.28±2.28）的8.1倍，C組（21.40±5.53）是B組的42％，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。Masson染色B組腎臟纖維化36％±3％，與ILK的IOD值呈正相關(guān)（r=0.672，p<0.01）。
　　 結(jié)論：