ChREBP在1型糖尿病小鼠腎臟的表達(dá)及調(diào)控.pdf

1、碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（carbohydrate response element binding protein，ChREBP）是糖、脂代謝過程中重要的轉(zhuǎn)錄因子，在調(diào)節(jié)哺乳動物體內(nèi)糖、脂代謝方面起到重要作用。有關(guān)肝臟的相關(guān)研究表明，葡萄糖和胰島素可以調(diào)節(jié)ChREBP的表達(dá)。在糖尿病情況下，異常的葡萄糖和胰島素有可能通過調(diào)節(jié)ChREBP的活性造成腎臟糖、脂代謝紊亂，使腎臟纖維化和腎功能受損。本實(shí)驗(yàn)觀察ChREBP在1型糖尿病小鼠腎臟

2、組織的表達(dá)及胰島素治療對其表達(dá)的影響，從而有助于進(jìn)一步探討ChREBP在糖尿病腎臟糖、脂代謝紊亂中的作用。
　　 目的：通過動物實(shí)驗(yàn)和體外細(xì)胞培養(yǎng)觀察ChREBP在小鼠腎臟中的分布及葡萄糖和胰島素對其表達(dá)的影響。
　　 方法：1．動物實(shí)驗(yàn)：1）10周齡的雄性C57BL/6野生型小鼠共30只，隨機(jī)分成三組，對照組10只；其余小鼠予腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，50mg/kg/day)5天，制備1型糖尿病小鼠模型，未予治療的小

3、鼠為糖尿病組；其余小鼠予皮下注射長效胰島素來得時(2-10units/Kg/day)30天，為治療組；2）利用免疫組織化學(xué)染色法檢測腎臟ChREBP的分布，利用免疫印記法和實(shí)時PCR法檢測ChREBP在三組小鼠腎臟中的表達(dá)變化；2．細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：原代培養(yǎng)小鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞，分別予以0.1u/ml的胰島素和不同濃度的葡萄糖(11mmol/L、20mmol/L、25mmol/L)刺激，利用免疫印記法檢測ChREBP的表達(dá)變化。
　　

4、 結(jié)果：1．動物實(shí)驗(yàn)：1）糖尿病小鼠造模成功，使用胰島素治療有效。與對照組相比，糖尿病組小鼠血中甘油三酯和膽固醇濃度明顯升高(p＜0.01)；而治療后小鼠血中甘油三酯和膽固醇含量明顯降低(p＜0.05）。2)免疫組化結(jié)果顯示.ChREBP主要表達(dá)在腎小管，而腎小球表達(dá)較少，且糖尿病組ChREBP表達(dá)水平較對照組明顯減少，而治療組ChREBP表達(dá)有所升高。3）在糖尿病組小鼠腎臟中，ChREBP總蛋白水平較對照組下降57％(P＜0.05)

5、，mRNA水平較對照組下降約39%(P＜0.01)；與糖尿病組相比，治療組中ChREBP總蛋白水平上調(diào)21%(P＜0.05)，mRNA表達(dá)水平上調(diào)9%(P＜0.05)。2．細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：與11mmol/L的葡萄糖相比，25mmol/L的葡萄糖可使腎小管上皮細(xì)胞ChREBP表達(dá)上調(diào)28%(p＜0.01)。胰島素則可使上述濃度葡萄糖刺激的腎小管上皮細(xì)胞ChREBP表達(dá)分別上調(diào)18%、17%(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：1型糖尿病小鼠較