兩株濱海植物內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、微生物是發(fā)現(xiàn)新型藥物先導(dǎo)結(jié)構(gòu)的重要資源，但是陸源微生物天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的重復(fù)發(fā)現(xiàn)問題已經(jīng)日益突出；海洋來源微生物由于高壓力、高鹽度等因素使得其次級代謝產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物活性具更好的新穎性和多樣性，而濱海地區(qū)作為海洋與陸地的交界帶，其微生物資源既具有前述兩者的共同特征，又有不同于兩者的性質(zhì)。本論文對濱海地區(qū)的植物樣品進(jìn)行微生物分離培養(yǎng)，并結(jié)合抗腫瘤篩選和化學(xué)分析篩選，選取了2株植物內(nèi)生真菌進(jìn)行深入的次級代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)分析和活性評價(jià)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括

2、：濱海植物來源微生物分離純化；微生物的初篩和目標(biāo)微生物的復(fù)篩；目標(biāo)微生物的發(fā)酵條件摸索、優(yōu)化及發(fā)酵；發(fā)酵液的提取，單體化合物的分離、純化、結(jié)構(gòu)鑒定、衍生化以及部分化合物初步抗腫瘤活性測定。
　　本研究從對廣西來源的12個(gè)紅樹林植物樣品（楊葉肖槿、黃槿、木欖、紅海欖、海漆、桐花樹、無瓣海桑、白骨壤、水黃皮、秋茄、海芒果、欖李）和其它3個(gè)濱海植物樣品（青島濱海植物樣品2個(gè)，東營濱海鹽地堿蓬植物樣品1個(gè)）進(jìn)行微生物的分離純化，共得到真菌

3、菌株147株，對這147株真菌進(jìn)行了抗腫瘤活性的初篩和復(fù)篩，得到具有抑制細(xì)胞增殖活性的菌株8株，對這8株微生物菌株進(jìn)行了HPLC分析，選取其中2株菌作為下步研究的目標(biāo)菌株，它們的共同特征為：HPLC指紋圖譜中含有紫外相似的系列吸收峰，出峰時(shí)間在30-45分鐘之間，這些特征表明這2株菌的次級代謝產(chǎn)物中同系物豐富，具有中等極性。通過對各種發(fā)酵條件下浸膏的TLC薄層點(diǎn)板、HPLC指紋圖譜、抗腫瘤活性篩選和浸膏產(chǎn)量的綜合考慮，確定了目標(biāo)菌株最優(yōu)

4、的發(fā)酵時(shí)間，培養(yǎng)基以及培養(yǎng)方式。
　　采用各種分離提取方法，從青霉屬真菌LD-68中分離得到7個(gè)化合物，并對化合物1進(jìn)行了結(jié)構(gòu)衍生化獲得7個(gè)化合物；從桔青霉真菌LD-11中分離得到20個(gè)化合物；從兩株真菌中共獲得34個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)類型包括彎孢霉菌素類化合物、雜肟環(huán)化合物、桔霉素類化合物、苯的衍生物等。
　　用MTT法對化合物1-5、8-18進(jìn)行了抗腫瘤活性測定，表明化合物2~5、18對A549和K562細(xì)胞具有中等抑制活性，