水貂腸炎細(xì)小病毒分離株的分子生物學(xué)特性及其致病性研究.pdf

1、在2015-2016年間，我們?cè)谥袊?guó)的主要水貂養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)收集了176份水貂腸炎病料，并成功分離出了8株細(xì)小病毒，分別命名為：MEV-SD1、MEV-SD2、MEV-SD3、MEV-SD4、MEV-SD5、MEV-SD6、MEV-SD7和 MEV-SD8。采用DNAStar軟件將8株新分離細(xì)小病毒的VP2基因序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)它們之間的核苷酸同源性達(dá)到99.4％-100%，與參考毒株的同源性為97.9%-100%。MEV-SD3與MEV-S

2、D5的同源性為100%，且與日本FPV-V211毒株的同源性最高，達(dá)到了99.9%。8株 MEV VP2之間的氨基酸同源性為99.0%-99.8%，與參考株之間的同源性為97.9%-99.7%，VP2氨基酸的突變主要發(fā)生在10個(gè)位點(diǎn)中。8株MEV NS1核苷酸之間的同源性為99.8%-100%，與參考毒株間的同源性為98.7%-100%。同時(shí)，8株MEV NS1氨基酸之間的同源性為99.3%-99.9%，與參考毒株間的同源性為98.1%

3、-99.9%，NS1蛋白基因并無(wú)特征性的氨基酸突變。
　　食肉動(dòng)物身上分離的細(xì)小病毒VP2的300位氨基酸，對(duì)決定它們的抗原性以及宿主選擇性都起著至關(guān)重要的作用。多數(shù)MEV的VP2300位的氨基酸為Val，但我們分離的6株細(xì)小病毒MEV-SD1至MEV-SD6中300位氨基酸突變成了Ala，與FPV在300位氨基酸一致。另外兩株水貂腸炎細(xì)小病毒MEV-SD7和MEV-SD8的300位則還為原來(lái)的Val，通過(guò)分析MEV與FPV VP

4、2的蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)300位氨基酸是區(qū)別兩株病毒的關(guān)鍵氨基酸?；赩P2核苷酸的系統(tǒng)發(fā)育分析表明，8株新分離的MEV形成了兩個(gè)分支，MEV-SD1至MEV-SD6與所有的FPV參考毒株位于同一個(gè)獨(dú)特的分支上，因此通過(guò)以上分析表明這6株新分離的細(xì)小病毒是FPV。
　　針對(duì)NS1蛋白基因我們也進(jìn)行了分析，結(jié)果只有極個(gè)別的氨基酸發(fā)生了替換，并沒(méi)有形成實(shí)質(zhì)性的突變。細(xì)小病毒編碼的NS1蛋白基因在遺傳進(jìn)化方面相對(duì)保守，它的主要功能是在病毒轉(zhuǎn)錄和

5、復(fù)制過(guò)程中起著重要作用，但卻不能夠?qū)?xì)小病毒宿主選擇性起到實(shí)質(zhì)性的影響?；贜S1基因的系統(tǒng)發(fā)育分析表明MEV與FPV位于一個(gè)大的分支上，并且8株新分離的MEV位于一個(gè)更小的進(jìn)化分支上，同時(shí)還包含著3株FPV，顯示了與FPV更親近的同源性，這進(jìn)一步證實(shí)了MEV-SD至MEV-SD6是FPV。
　　在動(dòng)物致病性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)感染MEV-SD1的水貂在接種后的24小時(shí)后就開(kāi)始發(fā)病，發(fā)病后的水貂精神沉郁，食欲下降或廢絕，渴欲增加，體溫升高。

6、腸胃癥狀明顯，有嘔吐的跡象，嚴(yán)重腹瀉，排出稀軟到水狀樣或膿狀樣糞便。4天后水貂的發(fā)病率為100%，死亡率為38.9%，動(dòng)物半數(shù)致死量為104.75 TCID50。剖解死亡水貂能發(fā)現(xiàn)胃腸道表現(xiàn)明顯，小腸粘膜呈壞死性、出血性、纖維蛋白性炎癥。組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)腸黏膜上皮細(xì)胞腫脹，腸絨毛上皮細(xì)胞凝固性壞死、脫落，固有層內(nèi)單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。致病性實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了新分離的貂源 FPV對(duì)水貂的致病性很強(qiáng)，能夠引起水貂很高的發(fā)病率和致死率。

7、
　　同時(shí)，血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，采集的84份健康水貂血清，其中抗MEV中和抗體效價(jià)大于10的只有10份水貂血清，僅占11.9%，其余的74份水貂血清中抗MEV中和抗體效價(jià)均小于10，高達(dá)88.1%。這表明了中國(guó)的水貂養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)還沒(méi)有形成足夠的規(guī)?；?，家庭式的飼養(yǎng)模式占據(jù)了大多數(shù)，這也導(dǎo)致了水貂飼養(yǎng)環(huán)境的臟、亂、差，管理方式的粗放性，飼養(yǎng)物種的多樣性，疫苗免疫程序的不合理性等，都直接造成了MEV的不斷突變以及與其它細(xì)小病毒的重組。