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1、鑒于脫氫表雄酮對(duì)VSMCs增殖及其調(diào)控因子的研究較少,該研究旨在細(xì)胞水平觀察脫氫表雄酮對(duì)VSMCs增殖的影響,繼而探討脫氫表雄酮對(duì)VSMCs增殖活性刺激因子表達(dá)的關(guān)系,擬初步探索脫氫表雄酮對(duì)VSMCs增殖的可能作用機(jī)制,為脫氫表雄酮對(duì)男性心血管的保護(hù)作用提供部分理論依據(jù).方法:1.貼塊法培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞,采用第3-6代細(xì)胞,使用不同濃度DHEA及ER和AR拮抗劑對(duì)細(xì)胞刺激24小時(shí),MTT法檢測(cè)DHEA對(duì)VSMCs增殖的影響.2.采用第
2、3-6代血管平滑肌細(xì)胞,給予10<'-8>M DHEA刺激24小時(shí),裂解細(xì)胞提取蛋白,考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測(cè)定蛋白濃度,使用Western Blotting法檢測(cè)PDGFR-β蛋白表達(dá)量.3.采用第3-6代血管平滑肌細(xì)胞,給予10<'-8>M DHEA刺激24小時(shí),提取總RNA,RT-PCR法檢測(cè)AT<,1>mRNA的相對(duì)表達(dá)量.裂解細(xì)胞,考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測(cè)定蛋白濃度,使用Western Blotting法檢測(cè)AT<,1
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