一種基于錨定PCR的微衛(wèi)星篩選新方法的研究.pdf

1、微衛(wèi)星是一種廣泛應(yīng)用的遺傳標(biāo)記。隨著研究的不斷深入，要求從基因組中大量篩選微衛(wèi)星位點(diǎn)。傳統(tǒng)的篩選方法雖然被普遍采用，但仍存在著許多缺點(diǎn)和不足，如需要構(gòu)建基因文庫(kù)、內(nèi)切酶的使用以及篩選出的位點(diǎn)重復(fù)率高等。文庫(kù)構(gòu)建耗時(shí)、費(fèi)力，且對(duì)技術(shù)、經(jīng)驗(yàn)要求較高；由于內(nèi)切酶切點(diǎn)分布的隨機(jī)性，許多微衛(wèi)星位點(diǎn)克隆中僅保留極少部分側(cè)翼序列，因而無法設(shè)計(jì)引物；重復(fù)率高耗費(fèi)了大量的經(jīng)費(fèi)和勞動(dòng)力。本研究創(chuàng)建了一種基于錨定PCR的篩選方法，從東北虎基因組中篩選了大量的

2、微衛(wèi)星位點(diǎn)，有效克服了上述問題。 首先進(jìn)行一個(gè)單引物PCR，在微衛(wèi)星重復(fù)區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)單引物Str-ACN，并在引物3'末端錨定一個(gè)堿基。然后利用末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶在PCR產(chǎn)物的3'末端上加一poly-C結(jié)構(gòu)。再利用另行設(shè)計(jì)的引物GG-N與Str-ACN配對(duì)進(jìn)行雙引物擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測(cè)序后，得到的就是微衛(wèi)星位點(diǎn)的下游序列。根據(jù)此下游序列再設(shè)計(jì)一個(gè)引物Nest1，利用相同的原理向上游擴(kuò)增，克隆測(cè)序得到上游序列，這樣就得到了完整的微