黃瓜花葉病毒M株系侵染性cDNA克隆的構(gòu)建及3a基因的原核表達(dá).pdf

1、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜花葉病毒M株系侵染性cDNA克隆的構(gòu)建及3a基因的原核表達(dá)姓名：談珺申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：高必達(dá);朱水芳20070601C o n s t r u c t i o n o f i n f e c t i o u se D N A c l o n e o fC u c u m b e rm o s a i c v i r u ss t r a i nM a n d 3 a g e n e

2、e x p r e s s e d i nA b s t r a c tT o t a lR N A W a Se x t r a c t e df r o m N i c o t i a n a t a b a c u mC V ．W h i t e B u r l e y w h i c hw a si n f e c t e db y C M V ( C u c u m b e r m o s a i c v i r u s )

3、M s t r a i na n d t h e na p p l i e dt oc o m p l e m e n t a r yD N A s y n t h e s i s b y r e v e r s et r a n s c r i p t i o n ．T h ef u l l - l e n g t hg e n o m e s e q u e n c e si n c l u d e dR N A l ，R A N

4、2 a n d R N A 3 w e r ea m p l i f i e db yp o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ．R e c o m b i n a n tp l a s m i do fp U C ·1 、p U C - 2 a n d p U C 一3 ，t h r e e f u l l —l e n g t ho f e D N A c l o n e so

5、 f C M V - M d r i v e ni n d i v i d u a l l yb y T 7R N A p o l y m e r a s op r o m o t e r , w e r ec o n s t r u c t e df o ri n v i t r ot r a n s c r i p t i o no f t h ev i r a lR N A ．T h e a n a l y s i so f s

6、e q u e n c es h o w s t h a t ，t h e f u l l ·l e n g t hs e q u e n c e o f C M V - M R N A l h a s3 3 6 1n u c l e o t i d e s ( n t ) a n d o n e o p e n r e a d i n g f l a m e s ( O R F l ) a r e n e s t e di

7、ni t , e n c o d i n g 11 2k ul ap r o t e i n ．5 ' N T R i s 9 3 n t ，3 ' N T R i s2 2 2 n t ；t h ef u l l —l e n g t ho fC M V - M R N A 2 h a s3 0 3 7n u c l e o t i d e s ( n t ) a n d t w o o p e n r e a d i

8、 n g f r a m e s ( o v a ：2 ，3 ) a r e n e s t e d i ni t ，e n c o d i n g9 6 ．7 k u 2 ap r o t e i na n d 1 3 ．1 k u 2 b p r o t e i n ．5 ' N T Ri s 8 7 n t ，3 ' N T R i s2 9 9 n t ；t h ef u l l - l e n g t ho f

9、 C M V - MR N A 3 h a s2 2 1 5n u c l e o t i d e s ( n t ) a n dt w oo p e nr e a d i n gf r a m e s ( O R F 4 ，5 ) a r en e s t e di n i t ,e n c o d i n g 3 1 k u3 a p r o t e i n a n d 2 4 k u C P p r o t e i n ．5 ’N

10、 T R i s l 2 0 n t ．3 ’N T R i s 2 8 9 n t ．T h et o t a l l e n g t hw a sc l o n e di n t op U C a n dt e m p l a t e sw h i c hW C l ' eu s e d f o r ／n v i t r ot r a n s c r i p t i o n W e r e g o tb y d i g e

11、s t i n gt h e r e c o m b i n a n t s ( p U C r l 、p U C ·2 a n dp U C - 3 ) w i t h S p h I ．B ym e c h a n i c a l i n o c u l a t i o n , t h e i n v i t r o t r a n s c r i p t s o fp U C 一1 、p U C - 2a n dp U

12、C ·3 w e r ei n f e c t i o nt o N i c o t i a n at a b a c u mC V ．W h i t eB u r l e y , c a u s i n gm o s a i cs y m p t o m o nt h el e a v e ss a f f l ea st h a to f w i l d t y p eC M V - M ．A l s o ，t h ev

13、i r u sa m p l i c a t i o n c o u l db e d e t e c t e db y w e s t e r nb l o t t i n g ．I no r d e rt o u n d e r s t a n d t h er o l e o fC M V - M 3 ag e n ei n v i r a lp a t h o g e n i c i t y , M Pp r o t e i n