2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、[目的]獲得D型沙眼衣原體質(zhì)粒蛋白pgp3基因及其蛋白，制備鼠源性多克隆抗體，鑒定蛋白免疫原性。
　　[方法]聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增目的基因，將其插入pZeroBack載體，對(duì)pZeroBack/pgp3和原核表達(dá)載體pGEX-6p-1進(jìn)行酶切后連接，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌DH5α，提取質(zhì)粒進(jìn)行酶切、測(cè)序、PCR鑒定。再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌BL21并經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，Western印跡鑒定目的蛋白，GST磁珠(GST M

2、agBeads)純化pgp3-谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶融合蛋白（pgp3-GST融合蛋白）。用純化后的蛋白免疫Balb/c小鼠，制備多克隆抗體，Western印跡、細(xì)胞免疫熒光鑒定抗體的特異性，間接ELISA法測(cè)定抗體滴度。
　　[結(jié)果]克隆目的基因測(cè)序長(zhǎng)度為795bp，序列與GeneBank中一致，Western印跡顯示目的蛋白分子量約為54000，并得到純化的蛋白。獲得鼠源性多克隆抗體，經(jīng)Western印跡和細(xì)胞免疫熒光鑒定抗體可特

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