血紅素氧合酶-1在心肌細胞缺氧復(fù)氧損傷中的保護機制.pdf

1、急性心肌梗死作為心血管疾病的一個主要類型，嚴(yán)重危害人類健康。溶栓和PCI等血運重建治療極大地改善了這些病人的預(yù)后，但是，這些方法也引起了心肌缺血再灌注損傷，降低了臨床療效。因此，心肌缺血再灌注損傷中心肌保護因子的作用一直是研究的熱點。血紅素氧合酶(HO)是血紅素降解的限速酶，可將血紅素分解為等摩爾的膽綠素、游離鐵和一氧化碳(CO)。HO分為3種類型，H0-1、HO-2和HO-3。HO-1為誘導(dǎo)型，HO-2和HO-3為結(jié)構(gòu)型。HO-1可被

2、多種刺激因素如：缺血再灌注、血紅素、熱休克和低氧等誘導(dǎo)表達升高。近年研究發(fā)現(xiàn)，HO-1在心肌缺血再灌注損傷中具有明顯的保護作用，但在心肌細胞水平上進一步闡明HO-1抗缺血再灌注損傷的具體機制目前研究尚較少。本研究利用原代培養(yǎng)的心肌細胞，通過缺氧復(fù)氧模擬缺血再灌注損傷，評價HO-1mRNA和蛋白在缺氧復(fù)氧后心肌細胞中的表達變化，并檢測NF-κB活性和細胞凋亡率，探討HO-1發(fā)揮保護作用的具體機制。 方法 通過建立缺氧復(fù)氧模

3、型模擬缺血再灌注損傷，并采用反復(fù)短暫缺氧復(fù)氧模擬缺血預(yù)適應(yīng)。將原代培養(yǎng)的心肌細胞分為對照組(C)、缺氧復(fù)氧組(AR)、氯化高鐵血紅素(Hemin)組(缺氧復(fù)氧前用Hemin預(yù)處理)、鋅原卟啉(ZnPP)組(缺氧復(fù)氧前用Hemin+ZnPP預(yù)處理)、去鐵胺(DFO)組(缺氧復(fù)氧前用Hternin+DFO預(yù)處理)、預(yù)適應(yīng)組(IPC)和IPC+ZnPP組(預(yù)適應(yīng)前用ZnPP預(yù)處理)。采用MTT法檢測細胞活力、測定細胞上清液乳酸脫氫酶(LDH)

4、活性評價心肌細胞損傷程度、RT-PCR法檢測HO-1mRNA表達、Western blotting法檢測HO-1蛋白表達、流式細胞儀檢測NF-κB活性和細胞凋亡率。 結(jié)果 1 在缺氧復(fù)氧模型中，缺氧復(fù)氧組HO-1 mRNA和蛋白的表達明顯升高(P<0.01)，Hernin預(yù)處理組HO-1表達比缺氧復(fù)氧組進一步升高(P(0.01)，ZnPP組和DFO組比之Hemin預(yù)處理組H0-1表達有所下降(P＜0.05)。缺氧復(fù)氧使

5、細胞活力下降、細胞上清液LDH活性升高；Hemin預(yù)處理使HO-1表達增高可提高細胞活力、降低LDH活性；用ZnPP阻斷HO-1表達使細胞活力下降、LDH活性升高。 2　在預(yù)適應(yīng)模型中，預(yù)適應(yīng)組HO-1 mRNA和蛋白表達比缺氧復(fù)氧組進一步上升(P＜0.01)，且預(yù)適應(yīng)組LDH活性比缺氧復(fù)氧組下降(P＜O.01)。 3　NF-κB活性檢測顯示缺氧復(fù)氧后NF-κB活性增高，Hemin預(yù)處理使H0-1表達升高可抑制NF-κB