抗老年癡呆癥藥“定志小丸”的研制和遠志酸及其類似物的分離.pdf

1、隨著我國社會已進入人口老齡化階段，老年癡呆癥(AD)的發(fā)病率也逐年增高，目前，全世界老年性癡呆癥患者人約有5000萬人，并且不斷趨于年輕化，該病的病因目前尚無確切定論，發(fā)病機理有多種假說，老年性癡呆癥不僅是一個醫(yī)學難題，而且將成為一個突出的社會問題。 “定志小丸”(DX-9386)源于唐代藥王孫思邈的《備急千金方》。處方由人參、茯苓、石菖蒲和遠志四味中藥組成，四藥合用，共奏補養(yǎng)心脾、祛痰化濕、益智定志之功，為中醫(yī)治療老年癡呆癥的

2、基礎(chǔ)方劑。原方為大蜜丸劑，日服用量大，不便服用，采用現(xiàn)代工藝方法，對其進行了中藥現(xiàn)代化研究。 現(xiàn)代藥理學研究表明，方中藥材起作用的有效成分為人參皂苷、遠志皂苷、人參多糖、茯苓多糖和石菖蒲的揮發(fā)油等成分。根據(jù)這些成分的性質(zhì)，結(jié)合祖國中醫(yī)理論，我們以總多糖和總皂苷的含量為指標，結(jié)合藥理實驗結(jié)果，通過L<,9>(3)<'4>正交試驗，確立了“定志小丸”的提取工藝，并利用醇沉和大孔樹脂柱層析進行純化，降低了出膏率，最大限度地提出了有效成

3、分，提高了有效成分的含量，制定了穩(wěn)定可控的工藝控制指標，并進行了初步的藥效學試驗。 遠志酸是2005年版中國藥典遠志含量測定的法定對照品，但目前國內(nèi)無對照品供應(yīng)。為制定“定志小丸”質(zhì)量標準的需要，從遠志總皂苷的水解產(chǎn)物中分離得到了遠志酸及其三個類似物，經(jīng)光譜鑒定與遠志酸結(jié)構(gòu)一致，純度檢查含量均在98％以上，達到了中藥對照品要求。 目的：研究“定志小丸”的提取純化工藝，制定工藝質(zhì)量控制標準，進行初步的藥效學試驗。遠志藥材水

4、解產(chǎn)物的分離，制備遠志酸對照品，為新藥申報提供對照品。 方法： 第一部分 ①“定志小丸”提取工藝研究：按照中國藥典(2005年版、)標準，選用合格藥材，通過單因素對比試驗，確定石菖蒲揮發(fā)油提取條件；以總多糖、總皂苷、出膏率及藥效學結(jié)果為評價指標，進行綜合評分，確定提取溶劑；在全方提取條件優(yōu)化中首先通過單因素試驗考察提取次數(shù)，然后通過L<,9>(3<'4>)正交試驗，考察提取時間、溶劑倍數(shù)和稀醇濃度的影響，最終確定

5、最佳工藝參數(shù)。 ②“定志小丸”除雜工藝研究：通過L<,9>(3<'4>)正交試驗優(yōu)化醇沉條件，對“定志小丸”提取液進行第一次醇沉除雜；通過大孔樹脂動態(tài)吸附試驗，選擇大孔樹脂型號，考察大孔樹脂吸附容量、上樣濃度、洗脫溶劑及溶劑用量，確定大孔樹脂純化工藝參數(shù)，利用大孔樹脂對醇沉后的提取液進行二次除雜。 ③建立“定志小丸”提取、除雜工藝質(zhì)量控制指標：可見-紫外分光光度法測定總多糖和總皂苷。 ④“定志小丸”初步藥效學試驗

6、：以小鼠跳臺試驗和生化指標SOD、AChE、MDA為指標，評價提取物對老齡小鼠的抗氧化、益智作用。 第二部分 單體成分的提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定：遠志藥材用稀醇提取，正丁醇萃取，大孔吸附樹脂富集得到總皂苷，總皂苷酸水解后，用硅膠色譜柱、制備液相等方法分離得單體化合物，利用UV、NMR、MS等波譜鑒定技術(shù)，確定單體化合物結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 第一部分 ①提取工藝條件：石菖蒲揮發(fā)油最佳提取條件為8倍量的水浸泡1

7、2小時，水蒸氣蒸餾提取6小時，用石油醚(60-90℃)萃取，石菖蒲揮發(fā)油可提取完全；全方最佳提取工藝為以8倍量50％乙醇回流提取2次，每次1.5小時。 ②最佳除雜條件：將“定志小丸”提取液濃縮到1g生藥/mL，加95％乙醇至含醇量為75％，進行醇沉，醇沉上清液濃縮到0.4g生藥/mL，上D101大孔樹脂柱進行二次除雜，分別用水、30％和60％醇進行梯度洗脫，收集水和60％醇洗脫液部分，減壓濃縮。 ③提取、除雜工藝質(zhì)量控制

8、方法：用紫外-可見分光光度法測定的指標成分總多糖和總皂苷能充分反映方中有效成分含量和產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，方法簡單、可靠、可控。 ④藥效學試驗表明，“定志小丸”提取物可以明顯減少小鼠跳臺試驗的錯誤次數(shù)，延長潛伏期，生化指標SOD、AChE、MDA測定結(jié)果表明具有統(tǒng)計學意義。 第二部分 從遠志皂苷水解產(chǎn)物中分離得到了四個單體化合物，經(jīng)波譜分析鑒定，化合物的結(jié)構(gòu)分別為：化合物Ⅰ為遠志酸，化合物Ⅱ為遠志皂苷元，化合物Ⅲ為遠志