芝麻素對人肺腺癌A-549細(xì)胞影響的研究.pdf

1、目的：探討原芝麻素對人肺腺癌A-549細(xì)胞株的抗增殖和誘導(dǎo)凋亡作用及其機制，為開發(fā)抗腫瘤中藥提供實驗和理論依據(jù)
　　方法：采用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)人肺腺癌A-549細(xì)胞;應(yīng)用MTT法測定原芝麻素對人肺腺癌A-549細(xì)胞株的抗增殖及細(xì)胞毒性作用；應(yīng)用倒置顯微鏡、HE染色法來觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(Flowcytometry，F(xiàn)CM)分析細(xì)胞周期分布和凋亡情況；AnnexinV/PI雙標(biāo)法分析細(xì)胞凋亡率；測定細(xì)胞Bc

2、l-2及Bax表達(dá)水平；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測藥物作用前后凋亡蛋白激酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表達(dá)變化并探討芝麻素對人肺腺癌A-549細(xì)胞株的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用機制。
　　結(jié)果：(1)MTT法檢測結(jié)果表明:10μg/ml-80μg/ml芝麻素對人肺腺癌A-549細(xì)胞株均有明顯抑制作用，且呈現(xiàn)出濃度和時間依賴性；（2)形態(tài)學(xué)觀察:倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)實驗組細(xì)胞體積變小變圓，核染色質(zhì)凝集，細(xì)胞

3、間連接疏松，貼壁能力減弱;HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)實驗組細(xì)胞質(zhì)脫水濃縮，伊紅染色增強等典型的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；(3)流式細(xì)胞儀分析結(jié)果:40μg/m1藥物作用48h后，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡峰，且S期細(xì)胞明顯增多，而G期細(xì)胞明顯減少，多數(shù)細(xì)胞阻滯在S期；Bcl-2蛋白的表達(dá)降低，Bax蛋白的表達(dá)升高。(4)免疫細(xì)胞化學(xué)(SABC法)檢測發(fā)現(xiàn)實驗組細(xì)胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)增加與對照組相比較均有顯著差異(P<0