葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78在肺癌耐藥中的作用.pdf

1、目的：本文采用RT-PCR、Western雜交等分子生物學(xué)技術(shù)，檢測在Ca2+拮抗劑A23187誘導(dǎo)下，人肺癌細(xì)胞NCI-H460GRP78的表達(dá)水平，并分析其表達(dá)在肺癌細(xì)胞對VP-16耐藥中的作用。 方法：將5×104個細(xì)胞接種于100ml的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)24小時后，倒掉培養(yǎng)液，加入含有不同濃度A23187(0、1、2、4、6μM)的新鮮培養(yǎng)液再培養(yǎng)24小時。然后采用RT-PCR、Western雜交檢測各組細(xì)胞中GRP78在核酸

2、和蛋白水平的表達(dá)，同時向各組細(xì)胞中加入不同濃度的VP-16，利用細(xì)胞克隆形成法測定細(xì)胞在VP-16作用下的生存率。根據(jù)GRP78的表達(dá)水平與細(xì)胞的生存率，闡明GRP78在肺癌耐藥中的作用。 結(jié)果：A23187可以明顯誘導(dǎo)人大細(xì)胞型肺癌細(xì)胞NCI-H460GRP78的表達(dá)，且其表達(dá)水平與A23187具有一定的濃度依賴性，但其變化在核酸和蛋白水平并非完全一致。當(dāng)A23187濃度為1μM和2μM時，即分別開始對于GRP78核酸和蛋白出

3、現(xiàn)誘導(dǎo)效應(yīng)，4μM和6μM時達(dá)到最大效應(yīng)(與對照組相比提高了4和2倍)，表明核酸比蛋白更容易被誘導(dǎo)。細(xì)胞克隆形成法測定顯示：誘導(dǎo)組細(xì)胞(A23187濃度為2-4μM)對VP-16的IC50值明顯高于對照組，而且呈濃度依賴性，最大耐藥指數(shù)為3.7(A23187濃度為6μM)。根據(jù)上述各組細(xì)胞的IC50以及GRP78表達(dá)的變化趨勢，可以推斷：GRP78能夠提高NCI-H460細(xì)胞對VP-16的耐藥性，并且其耐藥性與GRP78表達(dá)的程度有關(guān)。