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1、中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的主要內(nèi)容和關(guān)鍵問(wèn)題之一。本論文以防風(fēng)為研究對(duì)象,運(yùn)用多種現(xiàn)代分析技術(shù),從體外、體內(nèi)多個(gè)層次,建立了一系列中藥材藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的方法。多成分含量測(cè)定能嚴(yán)格的控制中藥中有效成分或指標(biāo)性成分的含量,而指紋圖譜則用代表中藥物質(zhì)基礎(chǔ)的化合物群來(lái)評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量,采用HPLC-TOF/MS等現(xiàn)代分析聯(lián)用技術(shù)對(duì)指紋圖譜中的色譜峰進(jìn)行鑒別,并對(duì)血漿、尿液中藥材的相關(guān)成分進(jìn)行鑒別,幫助我們進(jìn)行藥效物質(zhì)的篩選和機(jī)理研究。
2、中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究得到主要成分在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程,也為我們研究中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了視角,為闡明中藥的組方原理、作用機(jī)制提供很好的指導(dǎo)作用。
本課題采用HPLC-TOF/MS技術(shù)對(duì)防風(fēng)藥材中的化學(xué)成分進(jìn)行定性鑒別。利用飛行時(shí)間質(zhì)譜的精確分子量測(cè)定,比對(duì)化合物數(shù)據(jù)庫(kù),共鑒別32個(gè)成分,包括8個(gè)色原酮類成分和14個(gè)香豆素類成分。將HPLC-TOF/MS技術(shù)與化學(xué)計(jì)量學(xué)方法相結(jié)合,用于鑒別與區(qū)分不同產(chǎn)地來(lái)源的防風(fēng)藥材,并找到對(duì)
3、不同類別的防風(fēng)藥材起主要分類作用的特征性成分,如5-O-甲基維斯阿米醇苷、升麻素、升麻苷、3'-O-當(dāng)歸亥茅酚、亥茅酚苷、5-O-甲基維斯阿米醇和石防風(fēng)素均為關(guān)防風(fēng)(道地防風(fēng))的標(biāo)志性成分。該法為闡明中藥材質(zhì)量差異提供了有效的方法,并為藥材的質(zhì)量控制提供參考。
采用HPLC-TOF/MS技術(shù)進(jìn)一步鑒別了防風(fēng)血漿、尿液中相關(guān)成分及代謝產(chǎn)物。結(jié)果表明,防風(fēng)的主要入血成分為升麻素,而藥材中含量最高的升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇
4、苷入血量極微,說(shuō)明單以升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的體外藥材質(zhì)控方法不夠合理完善,藥材中升麻素的含量亦十分重要,為探索防風(fēng)可能的藥效成分及其體內(nèi)代謝過(guò)程奠定基礎(chǔ)。
根據(jù)藥材體外,體內(nèi)成分鑒別結(jié)果,建立了防風(fēng)中四種色原酮類成分升麻苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚苷的HPLC-DAD含量測(cè)定方法,對(duì)該方法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證,結(jié)果表明該方法可用于防風(fēng)中4個(gè)色原酮類成分的含量測(cè)定,并應(yīng)用于10批防風(fēng)藥
5、材的測(cè)定。該方法靈敏度高、穩(wěn)定性好、價(jià)格低廉、通用性強(qiáng),可用于防風(fēng)的常規(guī)質(zhì)量控制,為進(jìn)一步的藥理研究及中藥藥效物質(zhì)研究提供依據(jù)。
為進(jìn)一步研究防風(fēng)主要成分在體內(nèi)的吸收、代謝過(guò)程,建立了大鼠血漿中升麻苷、升麻素和5-O-甲基維斯阿米醇苷的HPLC-MS測(cè)定方法,并對(duì)其進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究。3個(gè)成分的線性范圍分別為12.99~230.5 ng·mL-1;12.81~24350 ng·mL-1;13.42~124.25 ng·mL
6、-1,其低、中、高濃度水平的絕對(duì)回收率均在94%~104%之間:精密度RSD均小于15%;穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦符合要求。血漿中內(nèi)源性物質(zhì)均不干擾樣品峰的測(cè)定。該法簡(jiǎn)便可靠,適合于生物樣品中三者的含量測(cè)定,并成功應(yīng)用于SD大鼠口服給藥防風(fēng)水煎液和升麻苷單體的藥代動(dòng)力學(xué)研究。比較大鼠灌胃給藥防風(fēng)水煎液,升麻苷單體水溶液后升麻苷和升麻素的藥時(shí)曲線,可見(jiàn)大鼠灌胃給藥防風(fēng)水煎液的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(AUC0-t,AUC0-∞和MRT)與單獨(dú)給藥升麻苷單體水溶
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