羥丁酸鈉對(duì)大鼠肝臟熱缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:該研究采用大鼠肝臟熱缺血/再灌注模型,探討GHB對(duì)肝臟熱缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用.方法:1.動(dòng)物模型制備:30只雄性Wister大鼠,體重200~250g,購自湖北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院.實(shí)驗(yàn)前12h禁食,自由飲水.0.3％戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉,正中切口進(jìn)腹,解剖肝門,分離肝動(dòng)脈、門靜脈.以小血管夾夾閉左、中葉肝蒂30min,松血管夾,恢復(fù)血供60min,取左葉肝組織,從下腔靜脈抽血.2.動(dòng)物分組:大鼠隨機(jī)分成5組,每組6

2、只.假手術(shù)組:不做任何處理;I/R組:處理如前述;GHB組:I/R前10min經(jīng)門靜脈注入GHB(300mg/kg);GHB+鈉絡(luò)酮組:應(yīng)用GHB前10min經(jīng)門靜脈注入鈉絡(luò)酮(0.4mg/kg);鈉絡(luò)酮組:I/R前10min經(jīng)門靜脈注入鈉絡(luò)酮(0.4mg/kg).3.血清ALT、AST、LDH測(cè)定:全自動(dòng)生化儀(Hitachi 7060)測(cè)ALT、AST、LDH.4.血清ET-1、TNF-α、NO測(cè)定:下腔靜脈血2ml,注入含10％N

3、a<,2>EDTA 3μl和抑肽酶40μl的試管中,混勻,4℃ 3000rpm離心10min,取血清,-20℃保存至檢測(cè),按試劑盒說明放免法測(cè)定ET-1、TNF-α,硝酸還原酶法測(cè)NO.5.肝組織MDA、SOD測(cè)定:取肝組織液氮保存至檢測(cè),用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA,羥胺法測(cè)SOD.6.細(xì)胞凋亡:蘇木素-伊紅染色常規(guī)病理形態(tài)觀察;脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)缺口末端標(biāo)記法(TUNEL):肝組織用4％多聚甲醛固定24h,常規(guī)石蠟包埋,切片厚5

4、μm,步驟按細(xì)胞凋亡試劑盒說明書進(jìn)行.結(jié)果判斷:細(xì)胞核被染成棕黃色者為陽性,每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野,記數(shù)至少1000個(gè)肝細(xì)胞中的凋亡細(xì)胞,用百分?jǐn)?shù)表示,作為凋亡指數(shù)(apoptotic index,AI).7.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用單因素方差分析、直線相關(guān)分析和q檢驗(yàn),認(rèn)為P<0.05有顯著差異.結(jié)論：GHB可能通過抗脂質(zhì)過氧化，下調(diào)肝臟內(nèi)皮素的表達(dá)改善微循環(huán)，下調(diào)TNF-α表達(dá)減少肝細(xì)胞凋亡，從