小鵝瘟病毒單克隆抗體的制備及膠體金診斷試紙的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)參照李茂祥老師的方法，采用2.2﹪NaCl、6﹪PEG濃縮病毒，Sepharose-4B柱層析，提純病毒抗原。用該抗原免疫6～8周齡Balb/C小鼠，進(jìn)行四次免疫。選擇免疫效價(jià)高的小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓廇細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，78孔有融合細(xì)胞生長(zhǎng)，融合率約為21﹪。用間接ELISA法篩選出8孔能分泌抗GPV的單克隆抗體，陽性率約為10.26﹪。采用有限稀釋法進(jìn)行3次克隆，經(jīng)檢測(cè)和篩選最終獲得3株能夠穩(wěn)定分泌抗GPV的單克隆抗體的雜

2、交瘤細(xì)胞，命名為2B8、2B10和2H7。用膠體金標(biāo)記制備好的GPV單克隆抗體2B8株，將馬抗GPV的多克隆抗體包被在NC膜的檢測(cè)線上，羊抗鼠抗體包被在陰性對(duì)照線上，建立檢測(cè)小鵝瘟病毒的膠體金免疫層析試紙條。試紙條的樣品端插入待檢樣品液體中，取出后平放，5分鐘后觀察結(jié)果。結(jié)果只在對(duì)照線(C)上出現(xiàn)一條紅線，表示為陰性結(jié)果；在檢測(cè)線(T)和對(duì)照線(C)上出現(xiàn)兩條紅線，表示為陽性結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的摸索，選用pH8.20.1﹪PEG