豬瘟病毒EO蛋白單克隆抗體的制備及其膠體金免疫層析檢測(cè)方法的初步探索.pdf

1、豬瘟(Classical Swine Fever, CSF)，是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的最重要的一種高度接觸性烈性傳染病之一，多年來被列為我國豬病防治研究的首要對(duì)象之一。世界上各國都采取了許多措施較好地控制了豬瘟的大規(guī)模爆發(fā)流行，但自上世紀(jì)70年代末以來，豬瘟的流行與發(fā)病特點(diǎn)發(fā)生了很大的變化，近年來我國豬瘟的發(fā)生又呈上升趨勢(shì)，臨床表現(xiàn)更為復(fù)雜，而且免疫豬群發(fā)生豬瘟越來越多。
　　 根據(jù)豬瘟病毒中國C株的全基因組序列，分別設(shè)計(jì)擴(kuò)增該病毒主

2、要結(jié)構(gòu)蛋白基因E0全長的相應(yīng)引物，利用RT-PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行了擴(kuò)增，獲得了714bp的基因片段。再將目的基因與pET-28a載體連接，構(gòu)建高效表達(dá)重組載體pET28a-C-E0。轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，重組子經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定正確后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測(cè)。結(jié)果表明融合蛋白在37℃下，1.0 mmol/L的IPTG濃度誘導(dǎo)下能良好表達(dá)，并且，融合蛋白均以包涵體的形式存在。用鎳柱純化包涵體

3、后能獲得較純的融合蛋白。
　　 用純化的E0抗原免疫BALB/c小鼠，制備脾細(xì)胞，與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞系融合，獲得2株能穩(wěn)定分泌抗CSFV E0蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為E01，和E02，抗體亞類為IgG2bκ，誘生腹水的抗體效價(jià)分別為1∶128000、1∶256000。間接ELISA檢測(cè)特異性表明，2株單克隆抗體與其他2種豬類病毒無交叉反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研制CSFV中和單抗治療劑和快速檢測(cè)試劑盒奠定了基礎(chǔ)。<