IBV DNA疫苗、DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物在雞體內(nèi)的分布及安全性研究.pdf

1、DNA疫苗在機體內(nèi)的分布和安全性是研究者們普遍關注的問題。本研究為IBVDNA疫苗及脂質(zhì)體在DNA疫苗中的應用提供了科學依據(jù)。 為研究本實驗室構建的禽傳染性支氣管炎病毒(IBV)真核表達質(zhì)粒pIBVS1、pIBVM、pIBVN混合DNA疫苗及DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物在雞體內(nèi)的組織分布和安全性，DNA疫苗經(jīng)腿部肌肉分點免疫接種7日齡非免疫健康雛雞，DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物經(jīng)腿部肌肉及滴鼻、點眼兩種免疫途徑接種相同日齡的非免疫健康雛

2、雞，利用PCR方法對疫苗在雞體內(nèi)的分布及與雞細胞基因組的整合進行檢測研究。并通過肌肉注射和滴鼻、點眼兩種途徑對1日齡雛雞免疫接種DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物；相同劑量連續(xù)免疫接種7日齡雛雞以及5倍常規(guī)使用劑量(超大劑量)免疫接種7日齡雛雞，來對DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物進行免疫毒性實驗研究。實驗期間對實驗雞進行一般臨床表現(xiàn)觀察，并分別在免疫后48h和30日齡進行血液學、血液生化學、病理及病理組織學檢測。 分布實驗結果表明：肌注DNA疫

3、苗、肌注及滴鼻、點眼免疫接種的DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物均于免疫接種后24h，在血液和所有檢測的組織中檢測到質(zhì)粒pIBVS1，pIBVM，pIBVN的分布，并能持續(xù)分布90d；在免疫后120d，疫苗免疫各組在血液中均已檢測不到三種質(zhì)粒的分布，各組織器官中均檢測不到質(zhì)粒pIBVS1的分布，DNA疫苗組僅在心臟、肺臟、腎臟、胸腺及注射部位肌肉檢測到質(zhì)粒pIBVM，pIBVN的分布，DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物肌肉注射組僅在心臟、脾臟、肺臟、腎臟及

4、注射部位肌肉檢測到質(zhì)粒pIBVM，pIBVN的分布，而DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物滴鼻、點眼免疫組除了在心臟和肝臟中檢測不到質(zhì)粒DNA的分布外，其余組織中均能檢測到質(zhì)粒pIBVM，pIBVN的分布。 安全性實驗表明：純化后的組織基因組DNA經(jīng)PCR擴增均呈陰性，未發(fā)現(xiàn)整合現(xiàn)象。試驗期間，各組動物行為活動未見異常，無死亡。免疫后48h，單劑量肌肉注射及滴鼻、點眼免疫組的紅細胞(RBC)數(shù)量，紅細胞壓積(HCT)與對照組相比差異顯著(P

5、＜0.05)，血紅蛋白(HGB)含量與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)，但都屬于正常波動范圍內(nèi)，恢復期間各組血液學指標與對照組相比無顯著性差異(P＞0.05)。免疫后48h，超大劑量組總蛋白(TP)及白蛋白(ALB)含量與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)，其余各組血液生化指標與對照組相比均無顯著性差異(P＞0.05)，恢復期間，所有疫苗免疫組血液生化指標均與對照組無顯著性差異(P＞0.05)，超大劑量接種可能因劑量偏高，在免疫初

6、期對雛雞肝臟的蛋白質(zhì)合成功能造成影響，但后期得以修復。病理剖解無異常變化，各疫苗免疫組與對照組相比無明顯因疫苗引起的病理變化。綜上所述，DNA疫苗及DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物能在免疫接種后24h內(nèi)迅速分布于全身，DNA疫苗能在心臟、肺臟、腎臟、胸腺及注射部位肌肉內(nèi)持續(xù)分布120d以上，通過滴鼻、點眼免疫接種的DNA疫苗-脂質(zhì)體復合物在分布的廣度上優(yōu)于DNA疫苗。未檢測到外源質(zhì)粒DNA與雞細胞染色體發(fā)生整合的現(xiàn)象，無疫苗引起的免疫毒性反應，