卵泡抑制素基因疫苗pXAIS在小鼠體內(nèi)的分布及安全性研究.pdf

1、pXAIS是由本實驗室所構(gòu)建的一種用于提高動物繁殖能力的卵泡抑制素基因疫苗，通過平衡致死系統(tǒng)減毒沙門氏菌C500所呈遞的一種核酸疫苗。分析基因疫苗在體內(nèi)的分布規(guī)律和安全性，對于提高基因疫苗的效果、促進其臨床應用具有十分重要的作用。本研究從活菌分布及基因整合、疫苗體內(nèi)分布及組織病理學變化等方面評價基因疫苗pXAIS的安全性，為pXAIS盡快的進入實踐應用提供了科學依據(jù)和理論基礎(chǔ)。主要研究如下：
　　 1．活菌分布及血液毒性測定

2、r>　　 100只37日齡的雌性小鼠隨機分為四組：（1）實驗組：小鼠灌胃免疫pXAIS疫苗200μL用最高劑量（2×1010CFU/ml）進行免疫。（2）C500對照組：小鼠灌胃空菌200gL，用最高劑量（2×1010CFU/ml）。（3）PBS對照組：灌胃注射PBS200μl。
　　 （4）空白對照組：無任何處理。只免疫一次。從實驗開始到進行免疫后14天內(nèi)對小鼠進行觀察，檢測免疫后不同時間載體活菌在小鼠體內(nèi)的分布，并進行血液

3、毒性檢測包括血液生化學指標和血液生理學指標。
　　 結(jié)果表明小鼠體重、食量及糞便與對照組之間未見明顯改變。在8h未檢測到活菌，在1-4d能陸續(xù)在各組織檢測到活菌，5d時在除卵巢外的其他組織都能檢測到活菌，然后活菌數(shù)逐漸下降，14d便檢測不到。血液生理學指標白細胞在免疫后一周內(nèi)，實驗組與對照組有差異，而且在免疫后7d，與所有對照組差異顯著（P<0.05），其他血液學及臨床生化指標均屬正常范圍內(nèi)波動，未發(fā)現(xiàn)與該疫苗相關(guān)的毒性反應。<

4、br>　　 2．基因整合、疫苗體內(nèi)分布及組織病理學觀察
　　 用200只30日齡的雌性昆明母鼠隨機分為兩個對照組和三個不同劑量的實驗組。分別用三個劑量組的DNA疫苗（2×108CFU/ml、2×109CFU/ml、2×1010CFU/ml），免疫小鼠，以PBS和C500作為對照，共免疫三次，免疫間隔為2周。整個實驗過程對小鼠進行臨床觀察，進行母鼠組織病理學變化的檢測及重量變化，并對疫苗在體內(nèi)的整合和分布情況進行檢測。
　

5、　 結(jié)果表明，實驗期間，各實驗組與對照組動物活動，精神狀態(tài)，尿及糞便性狀未見明顯差異。對照組和實驗組的內(nèi)臟重量也沒有顯著性差異。組織病理觀察結(jié)果顯示，受試動物在二免和三免的高劑量組免疫后出現(xiàn)有的肝臟損傷，但對照組有的也出現(xiàn)此情況，表明損傷與疫苗沒有構(gòu)成依賴關(guān)系。應用PCR和瓊脂糖凝膠電泳進行基因隨機整合檢測，其結(jié)果表明母鼠和仔鼠基因組DNA中并未發(fā)現(xiàn)整合現(xiàn)象。表明該疫苗發(fā)生整合的可能性很低，本實驗室所構(gòu)建的pXAIS基因疫苗具有較高的