2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建含CMV啟動子、pp65全長和分泌肽的PcDNA5.0轉染載體(即HCMV粗制基因疫苗),轉染至CHO細胞,建立HCMV pp65蛋白的高效表達系統(tǒng),為研制HCMV基因工程亞單位疫苗奠定基礎.方法將HCMV AD169株感染W(wǎng)I-38細胞,收集上清作為實驗用的模板,應用PCR法擴增pp65全長,轉化到pUC118HincⅡ/BAP質粒載體,測序;構建自制的含CMV啟動子、pp65和分泌肽基因的PcDNA5 0轉染載體,即擴增含

2、CMV啟動子及其上下游序列,克隆測序作為新的CMV啟動子,人工合成小鼠Igκ鏈分泌肽與pp65基因進行酶切、連接,應用交換引物的PCR法鑒定.同時應用脂質體法將該載體轉染至CHO細胞,加入潮霉素進行篩選,收集CHO細胞的上清液進行純化,應用聚丙烯酰胺凝膠電泳(考馬斯亮藍染色)、Westen-bloting和Western-ECL system斑點雜交鑒定pp65蛋白.結論:1.成功地完成了pp65全長的基因克隆.2.構建了含有分泌肽、C

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