基于LHRHa修飾的卵巢癌細(xì)胞靶向脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的研究.pdf

1、卵巢惡性腫瘤是危害女性健康的三大惡性腫瘤之一，其死亡率極高。雖然目前手術(shù)方法有所改進(jìn)、新的化療藥不斷出現(xiàn)，但仍有60％以上的頑固性卵巢癌經(jīng)治療后復(fù)發(fā)，其中很大原因是由于部分頑固性卵巢癌對(duì)化療不敏感或部分患者無(wú)法耐受化療毒副作用而放棄化療。因此，運(yùn)用新的手段將化療藥物定向輸送至腫瘤部位是解決這一難題的有效方法，而靶向給藥系統(tǒng)正可以定向地傳遞藥物至靶部位。 研究報(bào)道70％～80％的卵巢癌細(xì)胞上都高度表達(dá)一個(gè)10肽的LHRH(促黃體生

2、成素釋放激素)受體，而在其他的體內(nèi)正常組織器官上幾無(wú)LHRH受體，LHRH及其類似物(LHRHa)可以與癌細(xì)胞上的受體特異性結(jié)合。LHRH在體內(nèi)的半衰期非常短(2-3分鐘)；而在LHRH6位和10位氨基酸進(jìn)行置換或去除，得9肽的LHRHa，半衰期可達(dá)5小時(shí)以上，而與受體親和力并沒(méi)有下降。因此，可以利用LHRHa對(duì)受體的靶效應(yīng)，將LHRHa用作載體載上細(xì)胞毒性藥物，如化療藥等，從而提高藥物療效，減少外圍毒性，降低毒副作用。 配體實(shí)

3、現(xiàn)其載藥靶向性的方法可以選擇將配體共價(jià)結(jié)合到藥物上，制成具有靶向作用的前藥；也可以將配體共價(jià)結(jié)合到給藥載體上，載體攜帶藥物可以在配體的引導(dǎo)下特異性地靶向輸送到靶部位；也可以通過(guò)靜電吸附的方法將配體吸附到給藥系統(tǒng)表面，實(shí)現(xiàn)靶向性。本研究采用負(fù)電性脂質(zhì)材料所制備的負(fù)電性脂質(zhì)體，可以吸附具正電荷的靶向配體LHRHa。 多烯紫杉醇作為半合成的紫杉烷類化合物，治療鉑類耐藥的卵巢癌具有較好的效果，對(duì)使用紫杉醇耐藥的卵巢癌患者使用多烯紫杉醇治

4、療仍然有效，因此目前多烯紫杉醇已被列入治療卵巢上皮癌的一線用藥。因此本研究在制備能靶向于卵巢癌細(xì)胞的給藥系統(tǒng)時(shí)，選擇多烯紫杉醇作為模型藥物。研究首先合成負(fù)電性的琥珀酸單膽固醇酯(CHS)，以CHS代替膽固醇，制備載多烯紫杉醇脂質(zhì)體(Doc-Lipo)。 LHRHa.多烯紫杉醇脂質(zhì)體復(fù)合物L(fēng),HRHa-Doe-Lipo的制備分兩部進(jìn)行：第一步制備載藥脂質(zhì)體Doc-Lipo，第二步在脂質(zhì)體表面吸附LHRHa，得到LHRHa-Doc-

5、Lipo.首先確定了薄膜.超聲法用于脂質(zhì)體的制備；以透析法測(cè)定脂質(zhì)體對(duì)藥物的包封率，然后通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)篩選影響脂質(zhì)體質(zhì)量的各種因素，并從中找出影響最顯著的關(guān)鍵因素，然后通過(guò)中心組合設(shè)計(jì)，優(yōu)化處方和工藝，所制備的脂質(zhì)體包封率91.34％，載藥量20.49％，粒徑342nm，多分散指數(shù)0.255，表面電荷-31.9mV。為制備LHRHa-Doc-Lipo，通過(guò)試驗(yàn)篩選，確定加入CHS 1/2量的LHRHa，制備LHRHa-脂質(zhì)體復(fù)合物(LH

6、RHa-Doc-Lipo)。為增加脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，試驗(yàn)確定選擇葡萄糖、乳糖、甘露醇各2％(m/V)為支架劑，所制備的脂質(zhì)體凍干粉在4℃、-20℃條件下可保持至少穩(wěn)定3個(gè)月。 制備LHRHa一熒光脂質(zhì)體(LHRHa-Flu-Lip0)，體外細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)證實(shí)，人卵巢癌SKOV3細(xì)胞對(duì)其吞噬作用是普通熒光脂質(zhì)體(F1u-Lipo)的1.5～2倍左右，這種對(duì)LHRHa-F1u-Lipo的優(yōu)勢(shì)吞噬作用在用過(guò)量游離LHRHa飽和細(xì)胞表面受體

7、后被阻斷。而其它腫瘤細(xì)胞對(duì)L,HRHa-Flu-Lipo和Flu-Lipo的吞噬并沒(méi)有明顯差異，證實(shí)了該給藥系統(tǒng)的卵巢癌細(xì)胞特異靶向性。 為進(jìn)一步驗(yàn)證LHRHa-Doc-Lipo的體內(nèi)靶向性，建立了Doc的體內(nèi)檢測(cè)方法，通過(guò)測(cè)定藥物體內(nèi)分布。建立卵巢癌皮下移植模型，分別采用器官總藥量百分比和給藥劑量百分比評(píng)價(jià)靶向性。以器官總藥量百分比計(jì)算，腫瘤中藥物含量，5minLHRHa-Doc-Lipo組是Doc-Lipo組的1.12倍，是

8、TAX組的1.33倍；15minLHRHa-Doe-Lipo組是Doe-Lipo組的1.17倍，是TAx組的1.43倍；60minLHRHao-Doc-Lipo組是Doc-Lipo組的1.85倍，是TAX組的3.08倍。以給藥劑量百分比計(jì)算，腫瘤中藥物含量，5min LHRHa-Doc-Lipo組是Doc-Lipo組的1.15倍，是TAX組的1.89倍；15min LHRHa-Doc-Lipo組是Doe.Lipo組的1.23倍，是TAX