膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子緩釋微球制備及其對(duì)嗅鞘細(xì)胞增殖作用的初步研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子微球制備及體外釋放行為
　　 目的：
　　 評(píng)價(jià)不同制備工藝對(duì)GDNF緩釋微球的影響及微球所包裹的GDNF生物學(xué)活性，探索制備GDNF-PLGA緩釋微球的可行性。
　　 方法：
　　 以聚乳酸-羥基乙酸共聚物(polylactide-co-glycolide,PLGA)為包裹材料，并取乳酸(LA)與羥基乙酸(GA)單體組成比例分別為50/

2、50,65/35,75/25的三種不同PLGA。用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法(W1/O/W2)制備GDNF-PLGA微球，改變復(fù)乳攪拌速度分別為1000r/min、2000r/min、3000r/min，采用上述不同的PLGA和復(fù)乳轉(zhuǎn)速制得GDNF-PLGA微球，并對(duì)微球的粒徑、包封率、突釋率和體外釋放行為進(jìn)行研究，通過兩因素析因設(shè)計(jì)方差分析，探討PLGA中乳酸(LA)與經(jīng)基乙酸(GA)單體組成比例和復(fù)乳攪拌速度對(duì)GDNF-PLGA微球的的影響，

3、并用PC-12細(xì)胞檢測(cè)微球所釋放的GDNF生物學(xué)活性，確定最佳制備工藝。
　　 結(jié)果：
　　 PLGA的單體組成比例可影響微球的突釋率(P<0.05)，對(duì)粒徑和包封率的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨著GA比例的增加微球中GDNF釋放速度加快。復(fù)乳攪拌速度由1000r/min增加到3000r/min后，微球的粒徑顯著減小(P<0.01)，突釋率顯著增加(P<0.01)，體外釋放更為快速。微球中的GDNF在37℃下活性有效期可達(dá)20d

4、左右，較單純存放的GDNF活性有效期延長(zhǎng)lOd以上。
　　 結(jié)論：
　　 復(fù)乳法可制備具有較高包封率和適宜體外釋放時(shí)間的GDNF緩釋微球，且微球能延長(zhǎng)GDNF的活性有效期。
　　 第二部分、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子緩釋微球?qū)w外培養(yǎng)的嗅鞘細(xì)胞增殖作用的研究
　　 目的：
　　 研究膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子緩釋微球在體外促進(jìn)嗅鞘細(xì)胞增殖作用。
　　 方法：
　　 采用酶消化法分離和培

5、養(yǎng)大鼠嗅球的OECs，并用差速貼壁法進(jìn)行純化。將GDNF, GDNF-PLGA緩釋微球分別加入到OECs培養(yǎng)液中，控制培養(yǎng)液中GDNF總濃度為5Ong/ml。用GDNF培養(yǎng)液、GDNF-PLGA緩釋微球培養(yǎng)液、不含GDNF的單純培養(yǎng)液和含空白微球的培養(yǎng)液分別培養(yǎng)OECs。在設(shè)定的1d、3d、5d、7d、9d、11d用細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組的OECs數(shù)量，CCK-8法測(cè)定OECs的活力。
　　 結(jié)果：
　　 采用酶消化法結(jié)

6、合差速貼壁法可獲得較高純度的OECs。培養(yǎng)的第ld，GDNF培養(yǎng)液組、GDNF-PLGA緩釋微球培養(yǎng)液組和單純培養(yǎng)液的空白組的OECs數(shù)量和活力均無顯著性差異(P>0.05)，培養(yǎng)3、5d時(shí)，GDNF培養(yǎng)液組的OECs數(shù)量和活力優(yōu)于另外三組(P<0.05),7d以后，GDNF-PLGA緩釋微球培養(yǎng)液組的OECs數(shù)量和活力并超過了GDNF培養(yǎng)液組。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，空白組對(duì)照組和空白微球組的OECs數(shù)量和活力均處于較低水平，且兩者無顯著性差