鴨瘟病毒皮層蛋白UL14功能初探.pdf

1、iiIrllllllllJiplllllllrllllllllrrllllllJiiiiiiiY3292910’‘’一)111)7一’o學(xué)號(hào)墾靼l(fā)量!壁鰻⑧、舞陵熬譽(yù)博士學(xué)位論文鶴瘟病霉鏖扇鬻齲叫也躐物髓翻襟李方熬汪端書1教授專業(yè)名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：i’≯禽病嘗鋤瓶篳螺潤(rùn)摘要鴨瘟是由鴨瘟病毒引起鴨(鵝和雁形目的其他禽類)的一種急性、熱性、敗血性傳染病，其特征為流行廣泛、傳播迅速，易感鴨群的發(fā)病率和死亡率最高均可達(dá)100％。鴨瘟病毒的

2、核酸為雙鏈DNA，其基因組由一個(gè)獨(dú)特長(zhǎng)區(qū)(UL)和一個(gè)獨(dú)特短區(qū)(US)組成，含78個(gè)個(gè)開(kāi)放閱讀框(OI訌)，其中65個(gè)開(kāi)放閱讀框位于獨(dú)特長(zhǎng)區(qū)，ULl4基因位于獨(dú)特長(zhǎng)區(qū)的ULl3和ULl5基因之間，與ULl3基因有39bp的重疊。關(guān)于編碼鴨瘟病毒皮層蛋白的ULl4基因尚缺乏研究資料，我們對(duì)其開(kāi)展了生物信息學(xué)分析、原核表達(dá)及抗體制備、轉(zhuǎn)錄時(shí)相、表達(dá)時(shí)相、亞細(xì)胞定位、核定位信號(hào)及其與VPl6的相互作用、ULl4對(duì)病毒復(fù)制和結(jié)構(gòu)成熟的作用等進(jìn)行

3、了研究，獲得如下結(jié)果：1鴨瘟病毒ULl4基因的生物信息學(xué)分析對(duì)實(shí)驗(yàn)室鴨瘟病毒ULl4基因應(yīng)用相應(yīng)的軟件對(duì)其生物信息學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)分析，結(jié)果表明，ULl4基因編碼154個(gè)氨基酸，其中酸性氨基酸(AspGlu)為29個(gè)，堿性氨基酸(塒Lys)為26個(gè)，疏水性氨基酸63個(gè)；其中ULl4基因編碼蛋白分子量約175kDa，理論等電點(diǎn)為571，其分子式為C760H1256N2280238S4。ULl4蛋白不具有信號(hào)肽位點(diǎn)，可能不是分泌蛋白。ULl4編碼

4、的氨基酸序列共有36個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)，不存在跨膜區(qū)、抗原表位主要集中在1823、37、4950、80、105113和127150位氨基酸；在二級(jí)結(jié)構(gòu)中，Ⅱ螺旋(HH)、延伸鏈(EE)和無(wú)規(guī)則卷曲(CC)分別占7597％(107aa)、26％(4aa)和2143％(33aa)組成，現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫(kù)尚不能預(yù)測(cè)出其三級(jí)結(jié)構(gòu)。2鴨瘟病毒ULl4基因克隆原核表達(dá)及其多抗制備設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增含664bp的ULl4全基因序列，克隆至pMDl8T載體，亞克隆后

5、，構(gòu)建ULl4原核表達(dá)的重組載體pET32a()ULl4，轉(zhuǎn)移至大腸桿菌BL21表達(dá)系統(tǒng)，最優(yōu)表達(dá)條件為02mM的IPTG在37。C誘導(dǎo)6h，成功獲得約385kDa的表達(dá)重組蛋白(含21kDa組氨酸標(biāo)簽)，該蛋白能夠被兔抗DPV血清所識(shí)別。通過(guò)鎳柱層析純化法獲得純化ULl4重組蛋白，分別免疫小鼠和家兔，獲得的抗血清的抗體瓊擴(kuò)效價(jià)分別為1：8和1：32。3ULl4基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)時(shí)相及基因類型確定和亞細(xì)胞定位(1)收集鴨瘟病毒感染鴨胚成纖維細(xì)