脊髓室管膜瘤的蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、第一部分：基于雙向凝膠電泳的正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤差異表達蛋白的篩選與鑒定
　　目的：應(yīng)用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質(zhì)輔助激光解吸離子電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)的蛋白組學方法，研究正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤的差異表達蛋白質(zhì)，為進一步探索脊髓室管膜瘤的發(fā)病機制提供基礎(chǔ)。
　　方法：收集7例脊髓室管膜瘤患者的術(shù)中標本作為腫瘤組，4例新鮮尸體解剖得到的脊髓室管膜標本作為對照組。將2組標本裂解后提取蛋白質(zhì)

2、，定量后的蛋白質(zhì)進行IEF和SDS-PAGE雙向電泳分離，得到的2-DE圖譜經(jīng)考馬斯亮蘭染色后，通過軟件找到差異蛋白點并且使用MALDI-TOF-MS技術(shù)進行鑒定，最終獲得了腫瘤組和對照組的差異蛋白質(zhì)，部分差異蛋白質(zhì)進行了Western Blot驗證。
　　結(jié)果：建立了基于2-DE串聯(lián)MALDI-TOF-MS的正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤差異表達蛋白篩選與鑒定的技術(shù)路線。成功鑒定出50個有效的差異蛋白質(zhì)點(其中腫瘤組較對照組上調(diào)2

3、4個，下調(diào)13個，僅在腫瘤組中表達10個，僅在對照組表達3個)。Western Blot試驗證實了差異蛋白Vimentin、Annexin I和HSPA8在腫瘤組中的高表達。
　　結(jié)論：應(yīng)用2-DE串聯(lián)MALDI-TOF-MS技術(shù)成功對正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤進行蛋白組學分析，建立具有高分辨率及可重復(fù)性的2-DE圖譜，有效篩選并成功鑒定了50個差異蛋白質(zhì)。其中的Vimentin、AnnexinI、HSPA8、Calnexin和

4、Calreticulin等蛋白可能與脊髓室管膜瘤的發(fā)病機理有關(guān)。
　　第二部分：應(yīng)用三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-Ms/MS技術(shù)研究脊髓室管膜瘤和正常脊髓室管膜的蛋白表達譜
　　目的：串聯(lián)應(yīng)用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、強陽離子交換(SCX)、反相液相色譜(RPLC)和串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)的蛋白組學方法，研究正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤的全蛋白質(zhì)表達譜，為進一步探索脊髓室管膜瘤的發(fā)病機

5、制提供基礎(chǔ)。
　　方法：收集7例脊髓室管膜瘤患者的術(shù)中標本作為腫瘤組，2例手術(shù)中取得的脊髓室管膜標本作為對照組。將2組標本裂解后提取蛋白質(zhì)，定量后的蛋白質(zhì)先進行SDS-PAGE-維電泳分離，得到的膠條經(jīng)切割和酶解后，再通過SCX-RPLC分離，分離后的肽段通過LTO-Orbitrap行鑒定，鑒定數(shù)據(jù)經(jīng)Sequet數(shù)據(jù)庫檢索，最終獲得了腫瘤組和對照組的全蛋白質(zhì)表達譜。應(yīng)用生物信息學平臺DAVID和KEGG對蛋白質(zhì)進行了功能分類和病理

6、通路分析。
　　結(jié)果：建立了應(yīng)用于正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤蛋白質(zhì)表達譜研究的三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-MS/MS技術(shù)平臺。從正常脊髓室管膜組織和脊髓室管膜瘤中分別鑒定出了2758和2721個蛋白質(zhì)。
　　結(jié)論：首次應(yīng)用三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-MS/MS技術(shù)開展了正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤全蛋白表達譜的研究，建立了脊髓室管膜和脊髓室管膜瘤的蛋白表達譜。表達于腫瘤組和對照組的蛋白質(zhì)在分子量和等