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文檔簡介
1、本文研究了枯草芽孢桿菌菌株XM16產(chǎn)生抗菌蛋白的發(fā)酵條件,從其發(fā)酵液中分離純化出了抗菌蛋白,并對抗菌蛋白的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)進行了初步的探討,對抗菌蛋白的應(yīng)用打下了良好的基礎(chǔ)。 采用不同的溫度、不同的發(fā)酵時間、不同的搖床轉(zhuǎn)速、不同的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)基的不同pH值對拮抗菌株XM16進行培養(yǎng)發(fā)酵,檢測其發(fā)酵液的抗菌活性,得到了產(chǎn)生抗菌蛋白的最佳條件:在pH值7的BYP培養(yǎng)基中,以30℃的溫度,搖床轉(zhuǎn)速為200r/m震蕩培養(yǎng)48h,以30%和7
2、0%飽和度的硫酸銨進行分級鹽析,可得到大量的抗菌蛋白。 采用上述的培養(yǎng)條件,通過硫酸銨分級沉淀,經(jīng)過透析除鹽,濃縮蛋白粗提液經(jīng)過SephacrylS-100HR凝膠柱層析分離純化到一種對棉花枯萎病菌具有抑制用的蛋白質(zhì),凝膠層析的峰Ⅰ和峰Ⅱ都有抑菌活性,說明此拮抗菌株不止分泌一種抗菌蛋白,通過SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳可以看出含有兩種蛋白。 通過對抗菌蛋白進行溫度、pH、蛋白酶、氯仿的敏感性測定,發(fā)現(xiàn)該抗菌蛋白對熱
3、穩(wěn)定性較好,經(jīng)過100℃熱處理30min,活性未喪失;該抗菌蛋白在不同的酸堿情況下比較穩(wěn)定,但在強堿條件下活性會下降;經(jīng)氯仿處理后的抗菌蛋白溶液,仍具有明顯的抗菌活性,說明其對氯仿不敏感;在各種蛋白酶處理下,發(fā)現(xiàn)用蛋白酶E處理過的蛋白質(zhì)溶液喪失抑菌活性,但蛋白酶K和胰蛋白酶處理過的仍具有部分活性。 通過研究發(fā)現(xiàn)該抗菌蛋白含有兩種蛋白,其分子量分別為21KD和30KD,這兩種抗菌蛋白的質(zhì)譜分析表明:分子量為21KD的蛋白共含有19
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