三種中藥對(duì)植物病原真菌抑制作用研究.pdf

1、植物源農(nóng)藥，亦指利用植物的某些部位或提取得到的有效成分制成具有殺蟲或殺菌作用的農(nóng)藥。其具有安全、無毒害、無污染等良好作用，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展的需要和方向。因此，從植物中尋找具有殺菌活性的物質(zhì)，特別是具新型分子結(jié)構(gòu)和特殊作用機(jī)理的化合物是當(dāng)前新農(nóng)藥創(chuàng)制的一條重要途徑。
　　虎杖、黃連、藁本為我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，具有活血鎮(zhèn)痛、清熱利濕等作用，廣泛的應(yīng)用于我國(guó)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本文以這三種中藥為原料，選用不同的溶劑對(duì)其有效成分進(jìn)行提取，并用提取物對(duì)五種

2、常見的病原真菌進(jìn)行抑菌性研究，為新型抑菌劑的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　論文從以下三方面進(jìn)行研究。
　　1.三種中藥中有效成分的提取及抑菌活性研究
　　目的：提取三種中藥中的有效成分，確定三種中藥不同溶劑提取物抑制植物病原真菌的活性。
　　方法：采用四種溶劑（水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯）對(duì)三種中藥（虎杖、黃連、藁本）進(jìn)行平行提取，以植物常見病原真菌（小麥赤霉菌、水稻紋枯菌、玉米小斑菌、番茄灰霉菌、油菜菌核菌）為靶標(biāo)，對(duì)

3、三種中藥不同溶劑提取物進(jìn)行抑菌活性測(cè)定。
　　結(jié)果：虎杖、黃連、藁本中除藁本的乙酸乙酯未能得到提取物外，共得到11種提取物，并編號(hào)1-11＃；對(duì)小麥赤霉菌核番茄灰霉菌抑菌活性最好的都是黃連乙醇提取物，其EC50分別為3.66、0.13mg/mL；對(duì)水稻紋枯菌抑制活性做好的是虎杖乙酸乙酯提取物，其EC50為6.81mg/mL；對(duì)玉米小斑菌抑制作用做好的是黃連乙酸乙酯提取物，其 EC50為0.07mg/mL；對(duì)油菜菌核菌抑制作用最好的

4、是黃連水提物，其EC50為0.16mg/mL。
　　結(jié)論：三種中藥的11中提取物均有抑制真菌活性，但黃連各溶劑提取物可抑制5種病原真菌，表現(xiàn)出強(qiáng)的抑制真菌活性，可作為真菌抑制劑進(jìn)行深入的研究和商業(yè)開發(fā)。
　　2.五種植物病原真菌抑菌機(jī)理初步研究
　　目的：初步研究了提取物對(duì)5種真菌的抑制機(jī)制。
　　方法：通過測(cè)定孢子生成率、孢子萌發(fā)率、菌絲形態(tài)觀察、確定提取物對(duì)真菌生長(zhǎng)的抑制作用，通過測(cè)定溶液電導(dǎo)率、胞外多糖、胞

5、外蛋白質(zhì)含量，確定提取物對(duì)真菌細(xì)胞膜通透性的影響作用。
　　結(jié)果：黃連乙醇提取物處理后的小麥赤霉菌菌絲形態(tài)分枝增多，節(jié)間拉長(zhǎng)、變細(xì)，菌絲明顯變細(xì)。電導(dǎo)率隨著提取物濃度增大而增大，胞外多糖和蛋白質(zhì)的滲透量隨著處理液的濃度增加而增大?；⒄纫宜嵋阴ヌ崛∥锾幚硭炯y枯菌后，電導(dǎo)率隨著濃度增加而增大，胞外多糖和蛋白質(zhì)的滲透量隨著處理液的濃度增加而增大。黃連乙酸乙酯提取物對(duì)玉米小斑菌孢子的形成、孢子的萌發(fā)有明顯的作用。處理后的玉米小斑菌絲明顯

6、變細(xì)，分支增多，節(jié)間拉長(zhǎng)變細(xì)，分生孢子萌生的芽管變大。電導(dǎo)率隨，胞外多糖和蛋白質(zhì)的滲透量隨處理液濃度增大而增大。黃連乙醇提取物處理后的番茄灰霉菌菌絲形明顯變細(xì)、顏色變淺。電導(dǎo)率隨、胞外多糖和蛋白質(zhì)的滲透量都隨著處理液的濃度增加而增大。黃連水提物對(duì)油菜菌核菌孢子的形成及萌發(fā)有一定的抑制作用。處理后的油菜菌核菌菌絲沒有明顯變化。電導(dǎo)率、胞外多糖和蛋白質(zhì)的滲透量隨處理液濃度增大而增大。
　　結(jié)論：黃連乙醇提取物增大了小麥赤霉菌和番茄灰霉

7、菌的細(xì)胞膜通透性?；⒄纫宜嵋阴ヌ崛∥镌龃罅怂炯y枯菌的細(xì)胞膜通透性。黃連乙酸乙酯提取物能抑制玉米小斑菌孢子的形成及萌發(fā)，增大了細(xì)胞膜通透性。黃連水提物能抑制玉油菜菌核菌孢子的形成及萌發(fā)，增大了細(xì)胞膜通透性。
　　3.中藥提取物成分研究
　　目的：確定11種提取物中主要成分的含量。
　　方法：采用比色法測(cè)定提取物中的總黃酮、總多糖、總多酚及可溶性蛋白的含量；確定了準(zhǔn)確、穩(wěn)定的檢測(cè)白藜蘆醇、大黃素、大黃素甲醚、小檗堿、巴馬

8、汀、藥根堿、阿魏酸的HPCL測(cè)定方法，并分別對(duì)虎杖中的白藜蘆醇、大黃素、大黃素甲醚，黃連中的小檗堿、巴馬汀、藥根堿，藁本中阿魏酸的含量進(jìn)行了測(cè)定。
　　結(jié)果：虎杖的1-4#提取物大黃素甲醚的含量分別為0.17、0.96、0.15、3.39％，其他活性成分含量差別不大；黃連的各個(gè)提取物活性成分含量差異均不大；藁本中藁本內(nèi)酯未能檢出，阿魏酸含量分別為0.73、3.02、1.64%，其余成分含量差距不大。
　　結(jié)論：中藥提取物的抑