蘆薈多糖的分離純化及其硫酸酯化改性研究.pdf

1、目前分離蘆薈多糖的方法存在耗能高、污染重等缺點(diǎn),而雙水相體系做為一種新型的分離技術(shù),具有分離條件溫和、環(huán)境友好、易于操作、分相時(shí)間短、成本低、目標(biāo)產(chǎn)物分配系數(shù)大等優(yōu)點(diǎn)。因此,根據(jù)上述特點(diǎn)設(shè)計(jì)了一條新型的蘆薈多糖分離體系,并分析了蘆薈多糖的單糖組成,研究了它的體外抗氧化性;同時(shí)合成了蘆薈多糖硫酸酯,并對蘆薈多糖硫酸酯的體外抗氧化性進(jìn)行了研究。
　　 第一,選取曲拉通X-114雙水相體系分離純化蘆薈多糖,采用苯酚.硫酸法測定蘆薈多糖

2、在此體系的回收率及用考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)在此體系中的回收率,討論了曲拉通濃度、pH值、溫度、無機(jī)鹽的添加量對體系相比、蛋白質(zhì)回收率和蘆薈多糖回收率的影響。研究發(fā)現(xiàn):當(dāng)曲拉通X-114的濃度為4％,pH值為3,溫度為50℃,添加劑濃度為0.3 mol·L-1時(shí),體系達(dá)到最佳的分離條件,能有效地分離蛋白質(zhì)和多糖。在曲拉通X-114的濃度為4％,pH值為3,溫度為50℃,硫酸銨添加濃度為0.3 mol·L-1條件下處理蘆薈凝膠汁,分離純化得

3、到多糖的含量為85.72％,回收率為89.7％;其他條件不變,氯化鈉添加濃度為0.3 mol·L-1條件下處理蘆薈凝膠汁,分離純化得到多糖的含量為85％,回收率為99％。
　　 第二,多糖的紫外掃描和紅外光譜研究結(jié)果表明:蘆薈多糖在紅外光譜中有典型的特征吸收,蘆薈多糖在190-800 nm范圍內(nèi)掃描所得到的紫外可見光光譜圖,在190-200 nm之間有一個(gè)強(qiáng)烈的吸收峰,而在280 nm蛋白質(zhì)特征吸收處沒有吸收峰,在260 nm核

4、酸特征吸收處也沒有吸收峰,從而可推測所得蘆薈多糖中不含有蛋白質(zhì)、核酸。高效液相分析結(jié)果表明:雙水相分離的蘆薈多糖主要由甘露糖組成,同時(shí)有少量的葡萄糖,不含半乳糖、木糖和果糖。
　　 第三,研究了蘆薈多糖的硫酸酯化改性,考查了氯磺酸與吡啶的體積比、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間的影響,通過L9(34)正交試驗(yàn),優(yōu)化酯化條件為:氯磺酸與吡啶的體積比為1:3,反應(yīng)溫度為60℃,反應(yīng)時(shí)間是4 h;并且通過蘆薈多糖和硫酸酯化后的蘆薈多糖的紅外對比發(fā)現(xiàn)

5、:在硫酸酯化的蘆薈多糖中,1230 cm-1-1260 cm-1處是磺酸基的伸縮振動(dòng),815 cm-1處是C-O-S的伸縮振動(dòng),說明多糖分子發(fā)生了酯化反應(yīng),硫酸酯化使得多糖的結(jié)構(gòu)發(fā)生了一定的變化,從而表現(xiàn)出更強(qiáng)的生物活性。
　　 第四,通過對羥基自由基(·OH)及超氧陰離子自由基(O2-)的清除作用,對比了醇提蘆薈粗多糖、優(yōu)化條件下雙水相萃取的蘆薈多糖及硫酸酯化的蘆薈多糖的體外抗氧化性;研究發(fā)現(xiàn):抗氧化性從強(qiáng)到弱依次為蘆薈多糖硫